[发明专利]新孢子虫属的突变株及其用途

说明书

本发明涉及新孢子虫属物种(Neospora spp)突变株、其在药物组合物中的用途和其在疫苗组合物中的用途。

犬新孢子虫(Neospora caninum)是对新孢子虫病负有责任的细胞内寄生虫。它属于顶复门(Apicomplexa)，该门集合了大量的主要为细胞内的寄生虫。这些寄生虫对诸如新孢子虫病、弓形体病、疟疾、球虫病和隐孢子虫病的疾病负有责任。它们共同具有以多个步骤侵入宿主细胞的特殊过程，从而导致形成寄生泡，在所述寄生泡中寄生虫进行发育。

犬新孢子虫的生活史具有两个不同的阶段：在中间宿主例如小鼠、绵羊和牛中的无性阶段，其导致速殖子的产生和随后包含慢殖子的包囊的产生；和在终宿主(主要是狗)中的有性阶段，其导致包含子孢子的卵囊的产生，所述卵囊被排到粪便中。

动物的新孢子虫病在农业养殖领域中和尤其是在牛养殖中提出了重大的经济问题，在牛养殖中该疾病造成小牛增重减少、生育力下降、产乳减少，但尤其被认为是流产的主要原因之一。因此，每年在世界上，在牛存栏数中3至4千万例流产由犬新孢子虫造成。与鼠弓形体(Toxoplasma gondii)相反，该寄生虫的母-胎传播和胎儿的先天性感染不仅在妊娠过程中在初次感染的情况下发生，而且还在在妊娠之前在被慢性感染的母牛中发生。

牛的污染可以按照两条完全不同的途径来进行：

●通过水平污染，即通过摄入被由终宿主排出的卵囊所污染的食物。在妊娠的情况下，流产的风险因此为80％。

●通过垂直污染，即寄生虫从母亲至其小牛的母-胎传播。在妊娠之前被感染的母牛在随后的妊娠过程中可以要么再次流产，要么生出健康的小牛，要么最经常地将寄生虫传播给其小牛。该小牛将会被犬新孢子虫感染，并且如果它是雌性的，那么她从而将会具有高的将寄生虫传播给其后代的风险，同时具有流产的可能性。

这些后果非常显然地对于养殖业具有重大的经济影响。因此，新孢子虫病对关于在加利福尼亚的120万头奶牛的35M€的损失(Dubey,J.Am.Vet.Med.Assoc.,1999年4月15日,214(8):1160-3)、对关于在荷兰的160万头母牛的19M€的损失(Bartels等人,Vet.Parasitol.,2006年4月15日,137(1-2):17-27)和对关于在瑞士的70万头母牛的10M€(等人,Prev.Vet.Med.,2006年12月18日,77(3-4):230-53)的损失负有责任。

疫苗的开发是用于对抗新孢子虫病的主要目标。数种用于制造针对新孢子虫病的疫苗的策略目前处于研究之中：

●基于通过辐射、通过热等进行灭活的寄生虫的疫苗：这些疫苗产生保护性免疫应答，但通常需要存在佐剂和还有多次追加疫苗接种。目前，唯一的针对牛的新孢子虫病的疫苗在某些地理区域中和尤其在美国销售。它是由Intervet公司销售的疫苗该疫苗由犬新孢子虫的经灭活的速殖子和一种特殊的佐剂(Havlogene)构成。疫苗的效力(大约50％)被认为是部分的。此外，该疫苗的施用方式需要在疫苗接种的头一年期间以几周的间隔注射两次，然后在随后的年份注射一至两次。

●基于经减毒的活寄生虫的疫苗：这些株系通常要么在体外通过在诱变剂存在或不存在下在宿主细胞中培养的寄生虫的连续传代来获得，要么通过自然界中分离出毒力较弱的株系来获得，要么通过其他方法例如辐射来获得。这些疫苗通常是非常有效的但具有在分子方面未得到表征的主要缺点，并且总是让人担心回复至强毒形式。已经从以无症状方式被感染的小牛中分离出了数种分离物，例如Nc-Nowra(Miller等人,Aust.Vet.J.,2002年10月,80(10):620-5)和Nc-Spain-1H(Regidor-Cerrillo等人,Parasitology,2008年12月,135(14):1651-9)。这些减毒株的疫苗潜力正处在评价过程中。