[发明专利]用于检测生物组分的方法和系统

权利要求书

1.一种用于检测细胞的方法，所述方法包括：

将获自受试者的生物样本的细胞封装在微滴中，其中在所述微滴中存在至少一个细胞；

在有效使细胞裂解的条件下孵育所述微滴；

将聚合酶链式反应(PCR)试剂、检测组分和多个PCR引物引入所述微滴中并在允许PCR扩增的条件下孵育所述微滴以产生PCR扩增产物，其中所述多个PCR引物包括各自与一种或多种寡核苷酸杂交的一个或多个引物；以及

通过所述检测组分的检测来检测所述PCR扩增产物的存在或不存在，其中检测到所述检测组分指示PCR扩增产物的存在；

其中一个或多个步骤在微流体控制下进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在有效使细胞裂解的条件下孵育所述微滴包括将裂解剂引入所述微滴中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述一种或多种寡核苷酸是致癌基因。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述生物样本是血液并且所述方法包括至少部分地基于其中检测到PCR扩增产物的微滴的数目来确定所述受试者的血液样本中存在的循环肿瘤细胞(CTC)的数目。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所有步骤都在微流体控制下进行。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所有步骤都在相同的微流体装置上进行。

7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个PCR引物包括10个或更多个引物。

8.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个PCR引物包括20至100个引物。

9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个PCR引物包括10种或更多种致癌基因的引物。

10.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中在允许PCR扩增的条件下孵育所述微滴在与封装所述细胞并裂解所述细胞所用相同的微流体装置上进行。

11.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述PCR试剂和PCR引物与所述裂解剂同时加入。

12.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述PCR试剂在两个步骤或更多个步骤中加入。

13.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括将探针引入所述微滴中。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述探针在允许PCR扩增的条件下孵育所述微滴之前引入。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述探针是探针。

16.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中试剂通过将所述微滴与包含所述试剂的第二微滴合并而加入所述微滴中。

17.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中试剂使用小滴聚结或皮可注射而加入所述微滴中。

18.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中试剂通过包括下述步骤的方法加入所述微滴中：

d)将所述试剂乳化成小滴流，其中所述小滴小于所述微滴的尺寸；

e)使所述小滴与所述微滴一起流动；以及

f)合并小滴与所述微滴。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述小滴的直径为所述微滴的直径的25％或更小，并且多个小滴与所述微滴合并。

20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述合并包括施加电场。

21.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中试剂通过包括下述步骤的方法加入所述微滴中：

d)将所述试剂喷射至流体射流中；

e)使所述流体射流与所述微滴并排流动；以及

f)合并小滴与所述微滴。

22.根据权利要求21所述的方法，其中合并包括施加电场。

23.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述试剂的喷射包括加入增粘剂或表面活性剂。

24.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中试剂通过包括使用注射至所述微滴中的流体作为电极的方法而加入所述微滴中。