[发明专利]自动化酵母出芽测量

权利要求书

1.一种用于酵母细胞的出芽状态的自动化分析的方法，所述方法包括：

在缓冲溶液中用染料对将要进行酵母细胞出芽分析的样品进行染色；

获取所述染料染色的样品的荧光图像；

通过基于计算机的自动化处理分析所述染料染色的样品的荧光图像，以确定所述染料染色的样品中酵母细胞的图像的纵横比，由此确定所述样品中出芽的酵母细胞的状态。

2.权利要求1的方法，其中所述基于计算机的自动化处理包括圆形出芽酵母的形状的自动测量。

3.权利要求2的方法，其中如果圆形酵母细胞的纵横比为1.1以上，则它被认为是出芽的。

4.权利要求1的方法，其中所述染料选自由吖啶橙、SYTO 9、DAPI、Hoechst、钙荧光白、碘化丙啶、溴化乙锭、Oxonol、Mg-ANS、吖啶黄、ConA-FITC所组成的组。

5.权利要求1的方法，其中所述缓冲条件具有约5至约12的pH。

6.权利要求5的方法，其中所述缓冲条件具有约8至约12的pH。

7.权利要求1的方法，其中所述待测样品是来自于使用酵母的醇类生产过程的样品。

8.权利要求1的方法，其中所述待测样品是来自于生物燃料发酵过程的样品。

9.权利要求8的方法，其中所述待测样品包含玉米糖化醪的残渣。

10.权利要求8的方法，其中所述待测样品包含甘蔗、纤维素和玉米秸的一种以上残渣。

11.权利要求8的方法，其中所述生物燃料发酵过程包括从生物质生产乙醇。

12.权利要求8的方法，其中所述生物燃料包括从生物质生产丁醇。

13.权利要求8的方法，其中所述生物燃料包括从生物质生产甲醇。

14.权利要求1的方法，其中所述待测样品是来自于葡萄酒生产过程的样品。

15.权利要求1的方法，其中所述待测样品是来自于啤酒酿造生产过程的样品。

16.权利要求1的方法，其中所述酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种类。

17.权利要求4的方法，其中所述染料是浓度为约1μg/mL至约50μg/mL的吖啶橙。

18.一种用于同时确定酵母出芽和活性的方法，所述方法包括：

将待测样品在缓冲溶液中用第一染料并用第二染料进行染色；

获取用所述第一和第二染料染色的样品的第一荧光图像，该第一荧光图像对应于来自于所述第一染料的荧光；

获取用所述第一和第二染料染色的样品的第二荧光图像，该第二荧光图像对应于来自于所述第二染料的荧光；

通过基于计算机的自动化处理分析所述第一荧光图像以确定酵母细胞的纵横比，由此确定所述样品中出芽的酵母细胞的状态；以及

分析所述第二荧光图像以确定酵母的活性。

19.权利要求18的方法，其中所述基于计算机的自动化处理包括图像分析以测量出芽的酵母的形状。

20.权利要求18的方法，其中如果酵母细胞的图像的纵横比为1.1以上，则它被认为是出芽的。

21.权利要求18的方法，其中所述第一染料选自由吖啶橙、SYTO 9、DAPI、Hoechst、钙荧光白所组成的组，并且所述第二染料选自由碘化丙啶、溴化乙锭、Oxonol、Mg-ANS所组成的组。

22.权利要求21的方法，其中所述第一染料是吖啶橙并且所述第二染料是碘化丙啶。

23.权利要求18的方法，其中所述缓冲条件具有约5至约12的pH。

24.权利要求23的方法，其中所述缓冲条件具有约8至约12的pH。

25.权利要求18的方法，其中所述待测样品是来自于生物燃料发酵过程的样品。

26.权利要求25的方法，其中所述生物燃料发酵过程包括生产乙醇。

27.权利要求25的方法，其中所述生物燃料发酵过程包括生产丁醇。