[发明专利]目标粒子的检测方法

权利要求书

1.一种目标粒子的检测方法，其为使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统检测非发光性的粒子的方法，所述方法具有：

(a)使非发光性的观测用粒子和固相载体通过作为检测对象的目标粒子在溶液中或溶液的界面结合，形成复合体的工序；

(b)在所述工序(a)之后，将游离状态的观测用粒子由所述溶液中去除的工序；

(c)在所述工序(b)之后，使所述观测用粒子从所述复合体分离的工序；

(d)在所述工序(c)之后，使分离的观测用粒子分散而制备测定试样溶液的工序；和

(e)一边在所述测定试样溶液内移动所述光学系统的光检测区域的位置，一边检测从所述光检测区域发出的实质上包含一定背景光的光，生成按照时间顺序的光强度数据，将所述按照时间顺序的光强度数据中所述观测用粒子进入所述光检测区域内时产生的光强度的降低作为表示所述观测用粒子分别存在的信号而逐个地进行检测，从而检测所述测定试样溶液中的观测用粒子的工序。

2.根据权利要求1所述的目标粒子的检测方法，其中，所述观测用粒子的平均外径为所述光学系统的光检测区域的直径的35％以上。

3.根据权利要求1或2所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述目标粒子为核酸分子或核酸类似物质，

通过使所述复合体中的目标粒子变性而进行所述工序(c)中的所述观测用粒子的分离。

4.根据权利要求1～3的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述工序(d)为从所述观测用粒子分离去除所述固相载体，使该观测用粒子分散而制备所述测定试样溶液。

5.根据权利要求1或2所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述固相载体为平均外径小于所述光学系统的光检测区域的直径的35％的粒子，

代替所述工序(c)和(d)，进行：

(c’)在所述工序(b)之后，使由所述观测用粒子、所述目标粒子和所述固相载体形成的复合体分散，从而制备测定试样溶液的工序。

6.根据权利要求1～5的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，所述背景光为由所述测定试样溶液内分散的物质产生的荧光、磷光、化学发光、生物发光或散射光。

7.根据权利要求1～5的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，所述背景光为照明光。

8.根据权利要求1～7的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，以移动速度比所述单一粒子的扩散移动速度更快的速度进行所述光检测区域的位置的移动。

9.根据权利要求1～8的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，通过变更所述光学系统的光路而进行所述光检测区域的位置的移动。

10.根据权利要求1～9的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

表示所述观测用粒子的存在的信号的检测中，

测量所述背景光的强度，检测到具有低于规定阈值的光强度的信号时，判定为1个观测用粒子进入到所述光检测区域。

11.根据权利要求1～10的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

表示所述观测用粒子的存在的信号的检测中，

将所述按照时间顺序的光强度数据平滑化，

在所述平滑化的按照时间顺序的光强度数据中，测量所述背景光的强度，从而检测具有低于规定阈值的强度的向下凸的钟型脉冲状信号。

12.根据权利要求1～11的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述工序(e)中，进而

将所述逐个检测到的表示观测用粒子的存在的信号的个数进行计数，从而计数所述光检测区域的位置的移动中检测到的所述观测用粒子的个数。

13.根据权利要求1～12的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述工序(e)中，进而

根据检测到的所述观测用粒子的个数，确定所述测定试样溶液中的观测用粒子的数密度或浓度。

14.根据权利要求1～12的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

重复进行所述工序(e)中的所述光检测区域的位置的移动、从所述光检测区域发出的光的检测以及所述表示观测用粒子的存在的信号的检测，直至所述表示观测用粒子的存在的信号的个数到达预先决定的个数为止，

根据到达该预先决定的个数所需要的时间，确定所述测定试样溶液中的所述观测用粒子的浓度。