[发明专利]香草醛合酶

权利要求书

1.能够从阿魏酸产生香草醛的微生物，其中所述微生物能够产生阿魏酸和/或阿魏酸葡糖苷，并且包含编码香草醛合酶的异源核酸，其中所述香草醛合酶能够将阿魏酸转变成香草醛；并且其中所述香草醛合酶是：

(1)SEQ ID NO：1的香草醛合酶；

(2)SEQ ID NO：21的香草醛合酶；

(3)香草醛合酶，其由SEQ ID NO：1的第22至356位氨基酸组成；

(4)香草醛合酶，其由SEQ ID NO：1的第62至356位氨基酸组成；

(5)香草醛合酶，其由SEQ ID NO：1的第138至356位氨基酸组成；

(6)香草醛合酶，其由SEQ ID NO：1的第142至356位氨基酸组成；或

(7)下式的多肽：

[信号肽]-X-[断裂位点]-[截短的香草醛合酶]；

其中X是接头序列；

其中所述信号肽是对宿主生物为内源性的蛋白质的信号肽；

其中所述断裂位点是对于宿主生物为内源性的蛋白质的断裂位点，

并且其中所述截短的香草醛合酶能够将阿魏酸转变成香草醛，并且其是(1)-(6)部分中的任一种香草醛合酶。

2.权利要求1所述的微生物，其中所述微生物包括哺乳动物细胞、真菌细胞或细菌细胞。

3.权利要求1所述的微生物，其中所述微生物包含编码参与阿魏酸合成的酶的至少一种异源核酸。

4.权利要求3所述的微生物，其中所述酶选自：苯丙氨酸氨裂合酶、反式肉桂酸4-单加氧酶、酪氨酸氨裂合酶、4-香豆酰-3-羟化酶、咖啡酸O-甲基转移酶、苯丙氨酸氨裂合酶、反式肉桂酸4-单加氧酶、香豆酸-CoA连接酶、莽草酸O-羟基肉桂酰转移酶、4-香豆酰-3-羟化酶、咖啡酰-CoA O-甲基转移酶、咖啡酸O-甲基转移酶和黄酮3′-O-甲基转移酶。

5.权利要求3所述的微生物，其中所述酶是香草醇氧化酶。

6.产生香草醛、香草醇、香草醛葡糖苷和/或香草醇葡糖苷的方法，其包括：

a)提供权利要求1至5中任一项所述的微生物；

b)在支持所述微生物生长的培养基中培养所述微生物；

其中香草醛、香草醇、香草醛葡糖苷和/或香草醇葡糖苷由所述微生物产生；以及

c)从所述微生物和/或从所述培养基中分离香草醛、香草醇、香草醇葡糖苷和/或香草醛葡糖苷。

7.权利要求6所述的方法，其中所述培养基包含至多1mM香豆酸。

8.权利要求6所述的方法，其中所述培养基包含至少1mM阿魏酸。

9.权利要求6所述的方法，其中所述培养基包含糖蜜。

10.权利要求6所述的方法，其还包括在包含丁香酚的培养基中培养所述微生物。

11.权利要求6所述的方法，其还包括使所述香草醛葡糖苷去葡糖基化。

12.权利要求11所述的方法，其中使香草醛葡糖苷去葡糖基化包括使所述香草醛葡糖苷与葡糖苷酶相接触。

13.权利要求12所述的方法，其中所述葡糖苷酶是β-葡糖苷酶。

14.产生香草醛的方法，其包括：

a)提供权利要求1至5中任一项所述的微生物；

b)在阿魏酸和/或阿魏酸衍生物的存在下，在支持所述微生物生长的培养基中培养所述微生物，

其中所述微生物产生香草醛；以及

c)从所述微生物和/或从所述培养基中分离香草醛。

15.权利要求14所述的方法，其中所述阿魏酸衍生物是阿魏酸葡糖苷。