[发明专利]抗体或抗体组合物的制备方法

权利要求书

1.含有至少两个不同Fab区的抗体；或含有至少两种含Fab区的抗体的组合物，所述Fab区在至少两种抗体之间不同；的制备方法，所述方法包括：

i)在表达所述抗体的条件下，培养含有编码所述抗体的核酸的宿主细胞的步骤，和

ii)从宿主细胞培养物回收所述抗体的步骤，

其中，所述核酸编码至少一个含有半胱氨酸残基的区域，所述半胱氨酸残基在所述Fab区的轻链与重链之间形成非天然二硫键，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置与至少一个其它Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置不同。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述非天然二硫键和所述二硫键是CL区与CH1区之间的二硫键。

3.抗体的制备方法，所述抗体含有第一Fab区和第二Fab区，其中，所述第一Fab区含有第一轻链和重链，所述第二Fab区含有分别与所述第一轻链和重链不同的第二轻链和重链，所述方法包括：

a)将所述抗体的亲本抗体的第一Fab区的CL区和CH1区中的半胱氨酸以外的至少一个氨基酸残基取代为形成二硫键的半胱氨酸残基的步骤，和

b)通过形成所述二硫键的半胱氨酸残基，在第一Fab区中形成非天然二硫键的步骤，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述第一Fab区在与所述第二Fab区不同的位置形成二硫键。

4.含有至少两个不同Fab区的抗体，其中，至少一个Fab区含有在CL区与CH1区之间形成非天然二硫键的半胱氨酸残基，从而形成非天然二硫键，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述Fab区中的CL区与CH1区之间的二硫键的位置与至少一个其它Fab区中的CL区与CH1区之间的二硫键的位置不同。

5.如权利要求4所述的抗体，其含有两个不同Fab区。

6.含有至少两种含Fab区的抗体的组合物，所述Fab区在至少两种抗体之间不同，

其中，至少一个Fab区含有在轻链与重链之间形成非天然二硫键的半胱氨酸残基，从而形成非天然二硫键，

其中，由于所述非天然二硫键的存在，所述Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置与至少一个其它Fab区中的轻链与重链之间的二硫键的位置不同。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法、抗体或组合物，其中，所述抗体为多特异性抗体。

8.如权利要求7所述的方法、抗体或组合物，其中所述多特异性抗体为双特异性抗体。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法、抗体或组合物，其中，所述抗体是至少两个抗体片段通过接头连接或直接连接的抗体。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法、抗体或组合物，其中，所述抗体是抗体片段。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法、抗体或组合物，其中，所述抗体的Fc区被其它分子所取代。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法、抗体或组合物，其中，所述抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

13.如权利要求12所述的方法、抗体或组合物，其中，通过在选自a)轻链116位置-重链134位置、b)轻链116位置-重链141位置、c)轻链118位置-重链128位置、d)轻链121位置-重链126位置、e)轻链121位置-重链127位置、f)轻链124位置-重链126位置、g)轻链162位置-重链170位置、h)轻链162位置-重链171位置和i)轻链162位置-重链173位置中的至少一组轻链-重链位置所引入的半胱氨酸残基，形成非天然二硫键。

14.如权利要求12所述的方法、抗体或组合物，其中，通过在选自b)轻链116位置-重链141位置、c)轻链118位置-重链128位置、f)轻链124位置-重链126位置、g)轻链162位置-重链170位置、h)轻链162位置-重链171位置和i)轻链162位置-重链173位置中的至少一组轻链-重链位置所引入的半胱氨酸残基，形成非天然二硫键。