[发明专利]使用标记的核酸测序

权利要求书

1.一种借助于膜中邻近传感电极的纳米孔对核酸样品测序的方法，所述方法包括：

(a)向包含所述纳米孔的反应室提供标记核苷酸，其中所述标记核苷酸的单个标记核苷酸含有与核苷酸耦合的标记，所述标记借助于所述纳米孔是可检测到的；

(b)借助于聚合酶进行聚合反应，从而将所述标记核苷酸的单个标记核苷酸掺入与来自所述核酸样品的单链核酸分子互补的生长链；以及

(c)在掺入所述单个标记核苷酸期间借助于所述纳米孔检测与所述单个标记核苷酸缔合的标记，其中当所述核苷酸与所述聚合酶缔合时借助于所述纳米孔检测到所述标记。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述标记当与所述聚合酶缔合时被检测到多次。

3.如权利要求2所述的方法，其中在标记检测期之间对电极再充电。

4.如权利要求1所述的方法，其中在(c)中，掺入的标记核苷酸基于通过所述纳米孔检测到所述标记核苷酸的时间长度区分于未掺入的标记核苷酸。

5.如权利要求4所述的方法，其中通过所述纳米孔检测到掺入的标记核苷酸的时间与通过所述纳米孔检测到未掺入的标记核苷酸的时间的比率为至少1.5。

6.如权利要求4所述的方法，其中通过所述纳米孔检测到掺入的标记核苷酸的时间与通过所述纳米孔检测到未掺入的标记核苷酸的时间的比率为至少10。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述核苷酸与所述聚合酶缔合至少1毫秒的平均时间段。

8.如权利要求1所述的方法，其中当所述核苷酸不与所述聚合酶缔合时所述标记核苷酸在少于1毫秒内通过所述纳米孔。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述纳米孔能够以至少95％的准确度区分掺入的标记核苷酸和未掺入的标记核苷酸。

10.如权利要求1所述的方法，其中纳米孔能够以至少99％的准确度区分掺入的标记核苷酸和未掺入的标记核苷酸。

11.如权利要求1所述的方法，其中当所述标记从所述单个标记核苷酸释放时检测到与所述单个标记核苷酸缔合的所述标记。

12.如权利要求1所述的方法，其中在(b)中，与所述单个标记核苷酸缔合的标记穿过至少部分的所述纳米孔。

13.如权利要求12所述的方法，其中在(c)中，当穿过至少部分的所述纳米孔时检测到所述标记。

14.一种借助于膜中邻近传感电极的纳米孔对核酸样品测序的方法，所述方法包括：

(a)向包含所述纳米孔的反应室提供标记核苷酸，其中所述标记核苷酸的单个标记核苷酸含有与核苷酸耦合的标记，所述标记借助于所述纳米孔是可检测到的；

(b)借助于酶将所述标记核苷酸的单个标记核苷酸掺入与源自所述核酸样品的单链核酸分子互补的生长链；以及

(c)在掺入所述单个标记核苷酸期间，借助于所述纳米孔区分与所述单个标记核苷酸缔合的标记和与一个或多个未掺入的单个标记核苷酸缔合的一个或多个标记，其中当所述核苷酸与聚合酶缔合时借助于所述纳米孔检测到所述标记。

15.如权利要求14所述的方法，其中基于借助于所述纳米孔检测到(b)中掺入的所述单个标记核苷酸和所述未掺入的单个标记核苷酸的时间长度，区分(b)中掺入的所述单个标记核苷酸与未掺入的单个标记核苷酸。