[发明专利]卵泡发育和卵细胞成熟的刺激

说明书

本发明提供通过破坏Hippo信号传导途径来刺激哺乳动物的卵泡的方法。

联邦政府资助的研究和开发

本发明是在政府支持下根据美国国立卫生研究院授予的许可HD068158进行。政府享有本发明中的某些权利。

背景技术

哺乳动物生殖细胞的生长和成熟被包括由垂体前叶分泌的促性腺激素和局部旁分泌因子的激素复杂地控制。在成人卵巢内的大多数卵细胞(或卵母细胞)维持处于第一减数分裂前期的延长阶段，由周围卵泡体细胞被膜。周期性地，一组原始卵泡进入卵泡生长阶段。在此期间，卵细胞经历大体积增加，且卵泡颗粒细胞的数目增加。成熟卵细胞合成允许卵泡细胞增殖的旁分泌因子，且卵泡细胞分泌增强血管形成并允许卵细胞生长的生长和分化因子。在进行到某一阶段之后，卵细胞和它们的卵泡死亡，除非将它们暴露于防止体细胞凋亡的促性腺激素。

哺乳动物卵巢由作为基础功能单元的卵泡组成。卵泡的总数在年轻时确定，且该池的消耗导致生殖衰老(reproductive senescence)。每个卵泡发育，从而排卵或经历变性。单独的卵泡由最里面的卵细胞、周围的颗粒细胞和外层的卵泡膜细胞组成。每个卵泡的命运由内分泌因子以及旁分泌因子控制。在获取窦腔之前，卵泡发育经过原始阶段、初级阶段和次级阶段。在窦阶段，少数卵泡在青春期之后出现的周期促性腺激素刺激下达到排卵前阶段，并成为生殖年龄妇女的卵巢雌激素的周期分泌的主要来源。响应在每个生殖周期期间的排卵前促性腺激素激增，优势格拉夫卵泡(Graafian follicle)排卵以释放成熟的卵细胞以便受精，而剩下的卵泡膜和颗粒细胞经历转化以变成黄体。

一旦进入生长池，卵泡则在最低程度的损失下继续发展到初级阶段、次级阶段和早期窦阶段。尽管FSH治疗主要通过抑制早期窦卵泡的细胞凋亡而广泛用以在不孕患者中产生排卵前卵泡，但一些患者是对FSH治疗的低应答者，因为她们的卵巢含有很少的早期窦卵泡，如通过在月经周期的第三天她们升高的血清FSH和较低AMH水平所反映。

在整个生殖期中，原始卵泡经历初始募集以进入初级卵泡的生长池。在人类卵巢中，据估计初级卵泡达到次级卵泡阶段需要大于120天，而据估计从次级卵泡阶段生长到早期窦阶段需要71天。一旦开始进入生长池，卵泡就会发展达到窦阶段，并且直至早期窦阶段，都见到最低程度的卵泡损失。在周期募集期间，循环FSH的增加允许一群窦卵泡逃脱细胞凋亡性死亡。在该群体之中，主导卵泡通过分泌高水平的雌激素和抑制素以抑制垂体FSH释放而占优势地形成。结果是负向选择剩余的群体，导致其最后死亡。附随地，局部生长因子和脉管系统的增加允许正向选择优势卵泡，因此确保其最终生长和最后排卵及黄体形成。在周期募集之后，窦卵泡仅用2周就变成优势格拉夫卵泡。人类卵泡从原始阶段到排卵前阶段的总体发育需要超过6个月。

卵泡从最小的原始和初级卵泡发育到最大的排卵前卵泡需要不同的阶段依赖性刺激和存活因子。卵泡从初级阶段有效成熟到次级阶段、窦阶段和排卵前阶段的方法具有重大意义，包括用于体外和体内卵泡成熟的方法。本发明解决了该问题。

发明内容

提供通过以下促进哺乳动物卵泡生长到排卵前阶段的组合物和方法：使哺乳动物卵泡与有效剂量的破坏Hippo途径中信号传导的试剂或在被破坏的Hippo信号传导的下游起作用的试剂中的至少一种接触足以使所述卵泡生长到排卵前阶段的时间。所述接触可在不存在卵巢的实体破坏，即卵巢完整的情况下进行。在一些实施方案中，所述卵泡在离体培养物中接触所述试剂。在其它实施方案中，所述卵泡在体内与所述试剂接触。在所述接触在体内进行的情况下，所述试剂可局部地施用至所述卵巢，例如施用至遭受卵巢功能早衰的妇女、遭受多囊性卵巢综合征的妇女、中年不孕妇女等。所述有效剂量为允许卵泡经历充分生长以达到排卵前阶段的剂量。