[发明专利]用于免疫调节的沙奎那韦-NO

说明书

本发明涉及沙奎那韦硝酸酯，其用于治疗免疫系统障碍引起的疾病。

发明背景

沙奎那韦(((2S)-N-[(2S,3R)-4-[(3S)-3-(叔丁基氨基甲酰基)-十氢异喹啉-2-基]-3-羟基-1-苯基丁-2-基]-2-(喹啉-2-基甲酰胺基)丁二酰胺)，简写为Saq，是人免疫缺陷病毒(HIV)蛋白酶抑制剂，并且其被常规用于高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)的组成部分。除了其有效的抗逆转录病毒作用外，该药物还能有力地影响肿瘤细胞(Toschi等人，2011)。尽管如此，Saq的应用由于其毒性而受到限制(Flexner，1998)，并且减少副作用同时保持Saq抗癌性质的想法是该药物一氧化氮(NO)-修饰形式沙奎那韦-NO(Saq-NO)的启动生成。该活性剂通过将NO共价连接到母体药物上来制备(Maksimovic-Ivanic等人，2009和WO 2010/012466)，并且详细研究显示其与Saq相比对多种肿瘤具有优越的抗癌性质，所述的肿瘤包括黑素瘤、星形细胞瘤、前列腺癌细胞和多种人多药耐药的肿瘤细胞系，然而对进行治疗的小鼠不具有毒性(Maksimovic-Ivanic等人，2009；Mijatovic等人，2011；Rothweiler等人，2010；Donia等人，2010；Mojic等人，2012)。此外，Saq-NO保留了其母体药物的抗-HIV效力(Canducci等人，2011)。这些研究暗示Saq-NO具有抗肿瘤和抗-HIV治疗的潜力。

发明描述

现已发现，沙奎那韦硝酸酯具有式I，

下文称为NO-沙奎那韦、Saq-NO或OX-1001，其具有令人感兴趣的免疫调节性质，有效调节多克隆活化的和抗原刺激的T细胞中多种细胞因子的生成。Saq-NO能够调节Th1、Th2、促炎和抗炎细胞因子的生成。其作用在多克隆刺激的免疫细胞混合群(SPC和LNC)或纯化的T细胞(CD4+细胞)以及抗原刺激的T细胞(致脑炎的MBP-特异性细胞)中是同等有效的。应提及的是，已使用健康个体的外周血单核细胞(Delmonte，2007)和预先用Saq处理的小鼠脾细胞(Pacifici等人，1997)在体外和离体条件下研究了Saq的免疫调节性质，并且得到了相反的结果。在用PMA加上离子霉素刺激的人PBMC(Delmonte，2007)中，通过研究3种细胞因子，例如IL-2、IFN-γ和TNF-α，发现Saq在浓度范围为10至20μM时下调IL-2的合成以及IFN-γ的生成，而不影响TNF-α的生成。同时，Saq在浓度范围为5至20mM时抑制PHA或抗-CD3-诱导的增殖。相反，在进行的小鼠离体研究中，用Saq预先处理的小鼠获得的脾细胞与对照小鼠的脾相比，分泌出更多的IFN-γ和IL-2(Pacifici，1997)。相反地，体内暴露于Saq并不会改变IL-1β、IL-10和TNF-α的生成(Pacifici，1997)。因此，我们的体外研究结果表明，NO-杂化诱导了Saq的较大免疫药理学改变，随之而来的是更多和更大程度的免疫调节，包括对来自未分级脾细胞和/或纯化的鼠CD4T细胞的IFN-γ、IL-17、TNF-α、IL-4和IL-10的体外抑制(图2和3)。Saq-NO比Saq的作用更强，并且具有更大的幅度，并且对某些细胞因子在2.5至5mM的浓度即可观察到。除了对纯化的CD4+T细胞分泌的IL-17具有抑制作用外，Saq在这些浓度时没有作用(图3)。此外，分子研究证明了Saq-NO而不是Saq抑制了S6激酶的磷酸化(图4)。总之，这些数据证明了Saq-NO是新的化学实体，其被赋予不同于Saq且通常更强的免疫调节作用。

更特别的是，已经发现Saq-NO下调自身免疫疾病的发病机理所涉及的促炎细胞因子的生成，特别是鼠SPC、大鼠LNC和纯化的鼠CD4+细胞中INF-γ、IL-17、TNF-α、IL-4、IL-10和TNF的生成。