[发明专利]刺激敏感性微粒和使用方法

说明书

本文提供了刺激敏感性微粒和它们的用途，例如，在示踪从细胞混合物中回收稀少细胞群体(例如，循环肿瘤细胞)的效率中的用途；和在提供对照核酸以指标化不依赖于稀少细胞选择步骤的分子测定中的用途。

相关申请的的交叉引用

本申请按35 U.S.C.§119（e）要求提交于2012年9月27日的美国临时申请号61/706,126的权益，其通过引用以其整体结合到本文中用于所有目的。

发明领域

提供了刺激敏感性微粒及其用途，例如，在示踪从细胞混合物中回收稀少细胞群体(例如，循环肿瘤细胞)的效率中的用途；和在提供对照核酸以指标化不依赖于稀少细胞选择步骤的分子测定中的用途。

发明背景

实体组织癌开始生长于原发位点。随着疾病进展，转移出现在远端位置。这些转移事件加速疾病并最后导致死亡。作为转移过程的一部分，细胞或细胞碎片离开原发位点。转移的过程是复杂的。一部分转移过程涉及稀少循环肿瘤细胞(CTC)。越来越清楚在给定的患者中这些CTC不是整体(monolithic)群体。患者中的CTC分级对于理解突变(其是折磨患者的癌症的原因)是必要的。纯化和分离这些稀少肿瘤细胞(或细胞衍生事件)对于定义在患者的血中的致癌突变是必须的。许多细胞和细胞碎片存在于不含突变的全血中，因此为了分离有用的携带突变的细胞，需要纯化策略。

为了通过任何技术从细胞混合物中测量在稀少细胞群体（例如，循环肿瘤细胞(CTC)）的DNA基因组中的突变，需要足够数量或质量的DNA。通常2-4 ml的全血，可期望回收2-10个CTC。此数量的细胞必须用优秀的回收处理以确保携带突变的染色体在处理期间不被丢失。

简述

本文公开的实施方法部分地基于热不稳定性微球的发现以及它们在示踪从稀少细胞群体的细胞中分离基因组DNA的效率中的用途，所述稀少细胞群体从细胞混合物(例如，来自生物样本)中分离。本文中描述的热不稳定性微球和示踪方法提供了多步骤过程内部对照能力，其允许用于性能的校准，例如，在细胞分离的水平上和也在基因组DNA分离的水平上。

在一个方面中，本发明提供了热不稳定性微球。在一些实施方案中，热不稳定性微球包括：

i)热不稳定性聚合物，其包括内部空间和外部表面，其中所述聚合物在内部空间中含有靶核酸，其中所述聚合物包含明确的熔点并在大于约50℃的温度下释放核酸；和