[发明专利]靶向治疗性溶酶体酶融合蛋白及其用途

说明书

本发明一般涉及适用于治疗溶酶体储积疾病的治疗性融合蛋白及用于治疗此等疾病的方法。示范性治疗性融合蛋白包含溶酶体酶、溶酶体靶向部分(例如IGF‑II肽)及间隔肽。也提供治疗IIIB型黏多糖病(B型山菲立普综合征(Sanfilippo B Syndrome))的组合物及方法，其包含含有α‑N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶(Naglu)、溶酶体靶向部分(例如IGF‑II肽)及间隔肽的靶向治疗性融合蛋白。

技术领域

本发明主张2012年11月27日申请的美国临时发明第61/730,378号及2013年3月15日申请的美国临时发明第61/788,968号的优先权益，所述临时发明以全文引用的方式并入本文中。

本发明一般是关于适用于治疗溶酶体储积疾病的治疗性融合蛋白及治疗此等疾病的方法。示范性治疗性融合蛋白包含溶酶体酶、溶酶体靶向部分(例如IGF-II肽)及间隔肽。意欲溶酶体酶为α-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Naglu)且疾病为IIIB型黏多糖病(Mucopolysaccharidosis Type IIIB)(B型山菲立普综合征)。

技术背景

通常，哺乳动物溶酶体酶在胞质液中合成且横越ER，在ER中，其经N-连接的高甘露糖型碳水化合物糖基化。在高尔基体(golgi)中，藉由添加使此等蛋白质靶向溶酶体的甘露糖-6-磷酸(M6P)来修饰溶酶体酶上的高甘露糖碳水化合物。经由与两种M6P受体的任一者相互作用来使M6P修饰的蛋白质传递至溶酶体。最有利的修饰形式为当添加两个M6P至高甘露糖碳水化合物中时。

超过40种溶酶体储积疾病(LSD)是因在溶酶体中不存在一或多种溶酶体酶而直接或间接引起。正积极推行用于LSD的酶补充疗法。疗法通常需要LSD蛋白质以M6P依赖性方式被摄取且传递至多种细胞类型的溶酶体。一种可能的方法涉及纯化LSD蛋白质且用M6P对其进行修饰以并入碳水化合物部分。归因于与细胞表面上的M6P受体的相互作用，此经修饰物质可比未修饰LSD蛋白质更高效地由细胞摄取。

本发明的发明人先前已开发一种允许将治疗性酶更高效传递至溶酶体的肽基靶向技术。此专有技术称为糖基化非依赖性溶酶体靶向(GILT)，因为肽标签替代M6P作为靶向溶酶体的部分。GILT技术的详情描述于美国申请公开文本第2003-0082176号、第2004-0006008号、第2003-0072761号、第2005-0281805号、第2005-0244400号、及国际公开文本WO03/032913、WO 03/032727、WO 02/087510、WO 03/102583、WO 2005/078077中，所述所有公开文本的揭露内容据此以引用的方式并入本文中。

发明内容

本发明提供用于基于GILT技术达成高效溶酶体靶向的进一步改良组合物及方法。本发明尤其提供用于使用溶酶体靶向肽使溶酶体酶靶向溶酶体的方法及组合物。本发明也提供用于使用对IGF-I受体的结合亲和力降低或减弱及/或对胰岛素受体的结合亲和力降低或减弱及/或对弗林蛋白酶(furin)裂解具有抗性的溶酶体靶向肽使溶酶体酶靶向溶酶体的方法及组合物。本发明也提供包含溶酶体酶以及提供溶酶体酶融合蛋白的产生及向溶酶体中的摄取改良的IGF-II及间隔肽的溶酶体酶融合蛋白。在某些实施例中，溶酶体酶为α-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Naglu)。