[发明专利]用于提高表达的细菌提取物中选定蛋白的蛋白水解失活

权利要求书

1.功能性释放因子1蛋白(RF1)，其可被外膜蛋白T1(OmpT1)切割，其中可切断的OmpT1肽键位于对应于野生型RF1(SEQ ID NO:1)的氨基酸287-304的转换环区中，并且其中所述转换环区被修饰为包含三个相邻碱性氨基酸，所述碱性氨基酸在pH7.0下带正电荷。

2.如权利要求1所述的RF1蛋白，其中所述三个相邻碱性氨基酸独立选自包括以下的组：精氨酸和赖氨酸。

3.如权利要求1所述的RF1蛋白，其中所述转换环区被修饰为具有至少两个另外的相邻碱性氨基酸。

4.如权利要求1所述的RF1蛋白，其中第296位的天然天冬酰胺被取代为所述三个相邻碱性氨基酸之一。

5.如权利要求1所述的RF1蛋白，其中当修饰的和野生型蛋白以相似浓度存在于来自表达OmpT1的细菌的无细胞提取物中时，于30℃、30分钟后，OmpT1的切割活性大于野生型RF1(SEQ ID NO:1)的50％。

6.如权利要求1所述的RF1蛋白，其中所述转换环区包含选自由以下组成的序列的组的氨基酸序列：

QQAEASTRRKLLGSGDRS(SEQ ID NO:5)，

QQAEASTRRRLLGSGDRS(SEQ ID NO:6)，

QQAEASTRRKKLGSGDRS(SEQ ID NO:12)，

QQAEASTRRKRLGSGDRS(SEQ ID NO:13)，

QQAEASTRRKVLGSGDRS(SEQ ID NO:14)，

QQAEASTRRRKLGSGDRS(SEQ ID NO:15)，

QQAEASTRRRRLGSGDRS(SEQ ID NO:16)，

QQAEASTRRRVLGSGDRS(SEQ ID NO:17)，

QQAEASTRRKKKGSGDRS(SEQ ID NO:18)，

QQAEASTRRKKRGSGDRS(SEQ ID NO:19)，

QQAEASTRRKRKGSGDRS(SEQ ID NO:20)，

QQAEASTRRKRRGSGDRS(SEQ ID NO:21)，

QQAEASTRRRRRGSGDRS(SEQ ID NO:22)，

QQAEASTRRRKRGSGDRS(SEQ ID NO:23)，

QQAEASTRRRRKGSGDRS(SEQ ID NO:24)，和

QQAEASTRRRKKGSGDRS(SEQ ID NO:25)。