[发明专利]一种纯化治疗性蛋白质的方法

说明书

本发明总体上涉及一种减少溶液中至少一种选自由纤维蛋白溶酶原，组织纤维蛋白溶酶原激活物和/或其它蛋白酶组成的组的蛋白质水平的方法，所述溶液包舍至少一种选自由纤维蛋白原，因子VIII和血管性血友病因子(VWF)组成的组的蛋白质，该方法包含：(i)在选择的条件下，使包含至少一种选自由纤维蛋白原，因子VIII和VWF组成的组的蛋白质的原料通过疏水性电荷诱导的色谱树脂，所述选择的条件使得存在于原料中至少一种选自由纤维蛋白溶酶原，组织纤维蛋白溶酶原激活物和其他蛋白酶组成的组的蛋白质结合至树脂上；和(ii)回收通过树脂的包含至少一种选自由纤维蛋白原，因子VIII和VWF组成的组的蛋白质的溶液，其中溶液中至少一种选自由纤维蛋白溶酶原，组织纤维蛋白溶酶原激活物和其他蛋白酶组成的组的蛋白质的浓度相比于原料减少了至少50％。也提供了通过此方法回收的包含纤维蛋白原和/或因子VIII和/或VWF的溶液和药物制剂，以及它们的应用。

技术领域

本发明通常涉及一种在包含至少一种治疗性蛋白质的溶液中减少杂质水平的方法并涉及所得的包含治疗性蛋白质的溶液。更具体地，涉及一种在包含纤维蛋白原和/或因子VIII和/或血管性血友病因子(VWF)的原料中减少纤维蛋白溶酶原和/或组织纤维蛋白溶酶原激活物和/或其它蛋白酶水平的方法。本发明还通常涉及通过这些方法回收的包含纤维蛋白原和/或因子VIII和/或VWF的溶液和药物制剂，以及它们的应用。

背景技术

当前从包含天然存在的或重组的治疗性蛋白质的溶液中纯化所述蛋白质的方法，通常携带至少某些杂质进入到最终的制剂中。在一些情况下，杂质的存在，如蛋白酶，将使溶液中治疗性蛋白质不稳定，尤其是在存储期间。基于这个原因，许多治疗性蛋白质被存储为冻干的或冷冻的制剂。

虽然杂质的不稳定性水平可能会影响许多不同类型的治疗性蛋白，它们特别与那些用于保持止血的治疗性蛋白质相关。止血是一个重要的生理过程，其防止损害(如破裂)血管后的出血。促进止血有三个基本的机制：(i)血管收缩，(ii)血小板在破裂部位聚集；和(iii)凝血。在凝血期间，受损的内皮细胞释放组织因子(因子III)，其在Ca²⁺的帮助下依次激活因子VII。通过活化的血小板释放的因子XII激活因子XI。活化的因子VII和因子XI促进级联的酶促反应，导致因子X的活化。活化的因子X(因子Xa)以及因子III，因子V，Ca²⁺，和血小板凝血因子(PF₃)级联，激活凝血酶原激活物。凝血酶原激活物转化凝血酶原为凝血酶，其转化纤维蛋白原(因子I)为纤维蛋白，在损伤部位形成初始网格。该初始网格随后经由因子XIII而被转变为致密的纤维蛋白凝块，密封破裂直到该位置被修复。在凝血级联过程中，凝血酶也将激活因子 VIII，激活因子VIII是在循环过程中主要络合到血管性血友病因子(VWF)的一种糖蛋白亲辅因子。因子VIII与因子IXa相互作用以在Ca⁺²和磷脂存在的情况下激活因子X。

任意一个或多个参与凝血的蛋白的水平缺乏，包含纤维蛋白原，因子VIII，和/或先天性或后天性的血管性血友病因子(VWF)，可以导致血液凝固的不足和出血的风险。目前的治疗选择局限于给予一种或多种治疗性蛋白的药物制剂，以恢复所述蛋白质的内源性水平和保持止血。但是，现有的药物制剂，其通常来自于捐献的血液血浆或重组来源，包含酶原和蛋白酶(如凝血酶原，纤维蛋白溶酶原，组织纤维蛋白溶酶原激活物(tPA)和/或其它蛋白酶)，其可以在储存过程中使该治疗性蛋白质不稳定，如纤维蛋白原，因子VIII，或VWF。因此，这样的制剂在水溶液中是相对不稳定的，长期储存限于冻干的或冷冻的制剂。