[发明专利]表达来自烟曲霉的葡糖淀粉酶的里氏木霉宿主细胞和其使用方法

权利要求书

1.一种表达AfGATR或其变体的重组里氏木霉宿主细胞，所述AfGATR或其变体与SEQ ID NO:12或13具有至少80％序列同一性，其中在相同条件下所述里氏木霉宿主细胞以与烟曲霉宿主细胞相当的水平表达所述AfGATR或变体，所述烟曲霉宿主细胞表达与所述AfGATR或其变体具有相同氨基酸序列的AfGA或其变体。

2.一种表达AfGATR或其变体的重组里氏木霉宿主细胞，所述AfGATR或其变体与SEQ ID NO:12或13具有至少80％序列同一性，其中所述AfGATR或其变体相比于与AfGATR或其变体具有相同氨基酸序列的AfGA或其变体是更加热稳定的，并且其中所述AfGA或其变体在烟曲霉宿主细胞中表达。

3.一种用于产生重组AfGATR或其变体的方法，其包括：

(a)提供表达重组AfGATR或其变体的里氏木霉宿主细胞，所述AfGATR或其变体与SEQ ID NO:12或13具有至少80％序列同一性；

(b)在允许所述重组AfGATR或其变体产生的条件下培养所述宿主细胞；并且

其中所述AfGATR或其变体相比于与AfGATR或其变体具有相同氨基酸序列的AfGA或其变体是更加热稳定的，并且其中所述AfGA或其变体在烟曲霉宿主细胞中表达。

4.一种重组AfGATR或其变体，其由权利要求1或权利要求2所述的宿主细胞、或者根据权利要求3所述的方法产生。

5.根据权利要求4所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体在74℃下在pH 5.0下在10分钟内具有至少70％活性。

6.根据权利要求5所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体为AfGA1TR或其变体。

7.根据权利要求6所述的重组AfGA1TR或其变体，其中所述AfGA1TR或其变体在55℃至74℃的温度范围内在pH 5.0下在10分钟内具有至少70％活性。

8.根据权利要求7所述的重组AfGA1TR或其变体，其中所述AfGATR或其变体具有约68℃的最佳温度。

9.根据权利要求5所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体为AfGA2TR或其变体。

10.根据权利要求9所述的重组AfGA2TR或其变体，其中所述AfGA2TR或其变体在61℃至74℃的温度范围内在pH 5.0下在10分钟内具有至少70％活性。

11.根据权利要求10所述的重组AfGA2TR或其变体，其中所述AfGA2TR或其变体具有约69℃的最佳温度。

12.根据权利要求4-8中任一项所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体包含与SEQ ID NO:12具有至少90％、95％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

13.根据权利要求12所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体包含SEQ ID NO:12。

14.根据权利要求4-8中任一项所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体由与SEQ ID NO:12具有至少80％、90％、95％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。

15.根据权利要求14所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGA1TR或其变体由SEQ ID NO:12组成。

16.根据权利要求4-5和9-11中任一项所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体包含与SEQ ID NO:13具有至少90％、95％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

17.根据权利要求16所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体包含SEQ ID NO:13。

18.根据权利要求4-5和9-11中任一项所述的重组AfGATR或其变体，其中所述AfGATR或其变体由与SEQ ID NO:13具有至少80％、90％、95％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。