[发明专利]利用密码子随机化和诱变来合成基因文库的方法

权利要求书

1.一种合成第二基因文库的方法，所述方法包括：

提供编码特定蛋白序列但具有不同的核酸碱基序列的包含随机化密码子的第一基因文库；

将所述第一基因文库片段化为核酸片段；

确认所述核酸片段的碱基序列；和

使用密码子随机化的碱基序列，将碱基序列经确认的核酸片段重新组装成片段化前的基因序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在所述提供步骤中，所述随机化密码子通过以下方式制备：将简并密码子插入编码特定蛋白序列的基因序列中，从而将编码相同蛋白的不同的核酸碱基序列组合。

3.如权利要求1所述的方法，其中，在所述提供步骤中，所述第一基因文库中的随机化密码子的基因序列的两个末端均提供有选自由条码标签序列、限制性酶识别序列和侧翼序列组成的组的至少一种。

4.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括：在所述提供步骤之后，将所述第一基因文库中的密码子随机化的基因序列的数量控制在通过下一代测序能够验证的数量。

5.如权利要求1所述的方法，其中，在所述确认步骤中，序列确认使用下一代测序来进行。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述重新组装步骤包括：

使用所述密码子随机化的碱基序列找到所述碱基序列经确认的核酸片段的定位位置；和

按照所定位的位置连接具有重叠碱基序列的核酸片段。

7.如权利要求6所述的方法，其中，在所述连接步骤中，所述重叠序列的长度为20bp～80bp。

8.一种无错的基因文库，其包含根据权利要求1～7中任一项所述的方法制造的编码相同蛋白但具有不同的碱基序列的基因。

9.一种从权利要求8所述的基因文库中选择性地扩增所需的基因序列的方法。

10.一种合成突变基因的文库的方法，所述方法包括：

提供编码特定蛋白序列但具有不同的核酸碱基序列的包含随机化密码子的基因文库；

诱导所述基因文库发生突变；

将突变的基因文库片段化为核酸片段；

确认所述核酸片段的碱基序列；和

使用密码子随机化的碱基序列，将碱基序列经确认的核酸片段重新组装成片段化前的基因序列。

11.如权利要求10所述的方法，其中，在所述诱导步骤中，所述突变是随机突变。

12.如权利要求10所述的方法，其中，在所述诱导步骤中，所述突变通过诱变扩增来进行。

13.如权利要求12所述的方法，其中，所述诱变扩增是易错PCR。

14.如权利要求10所述的方法，其中，所述突变基因的文库是编码在特定位置具有突变氨基酸的蛋白的不同的碱基序列的簇。

15.如权利要求10所述的方法，其中，所述突变基因的文库是编码在整个氨基酸区域中具有随机突变的蛋白的不同的碱基序列的簇。

16.一种按照权利要求10～15中任一项所述的方法制造的突变基因的文库。

17.一种从权利要求16所述的突变基因的文库中选择性地扩增所需的基因序列的方法。