[发明专利]具有改进活性的DNA聚合酶

权利要求书

1.与对照DNA聚合酶相比具有增加的逆转录酶效率的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶的与SEQ ID NO:1的位置763对应的氨基酸是除了M或I以外的任意氨基酸，且其中除了所述对照DNA聚合酶的与SEQ ID NO:1的位置763对应的氨基酸是M或I以外，所述对照DNA聚合酶具有与所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与选自以下的聚合酶具有至少80%、优选至少90%、更优选至少95%氨基酸序列同一性的氨基酸序列：

(a)栖热菌属种Z05 DNA聚合酶(Z05) (SEQ ID NO:1)；

(b)水生栖热菌(Thermus aquaticus)DNA聚合酶(Taq) (SEQ ID NO:2)；

(c)丝状栖热菌(Thermus filiformis)DNA聚合酶(Tfi) (SEQ ID NO:3)；

(d)黄栖热菌(Thermus flavus)DNA聚合酶(Tfl) (SEQ ID NO:4)；

(e)栖热菌属种sps17 DNA聚合酶(Sps17) (SEQ ID NO:5)；

(f)嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)DNA聚合酶(Tth) (SEQ ID NO:6)；

(g) Thermus caldophilus DNA聚合酶(Tca) (SEQ ID NO:7)

(h)海栖热袍菌(Thermotoga maritima)DNA聚合酶(Tma) (SEQ ID NO:34)；和

(i)那不勒斯栖热袍菌(Thermotoga neopolitana)DNA聚合酶(Tne) (SEQ ID NO:35)。

3.根据权利要求1和2中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ ID NO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶的与SEQ ID NO:1的位置763对应的氨基酸是T。

5.根据权利要求1-4中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述与SEQ ID NO:1的位置580对应的氨基酸是除了D以外的任意氨基酸。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述与SEQ ID NO:1的位置580对应的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

7.根据权利要求1-6中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述与SEQ ID NO:1的位置709对应的氨基酸是除了I以外的任意氨基酸。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述与SEQ ID NO:1的位置709对应的氨基酸选自K、R、S、G和A。

9.根据权利要求1-8中的任一项所述的DNA聚合酶，其中所述与SEQ ID NO:1的位置763对应的氨基酸是T，与SEQ ID NO:1的位置709对应的氨基酸是K，且与SEQ ID NO:1的位置580对应的氨基酸是G。

10.根据权利要求1-9中的任一项所述的DNA聚合酶，其中与所述对照DNA聚合酶相比，所述DNA聚合酶具有相同或基本上相似的DNA依赖性的聚合酶活性。

11.一种重组核酸，其编码根据权利要求1-10中的任一项所述的DNA聚合酶。

12.一种表达载体，其包含权利要求11的重组核酸。

13.一种宿主细胞，其包含权利要求12的表达载体。

14.一种生产DNA聚合酶的方法，所述方法包括：

在适合于表达编码DNA聚合酶的核酸的条件下，培养权利要求13的宿主细胞。

15.一种进行引物延伸的方法，所述方法包括：

在适合于延伸引物的条件下，使如权利要求1 - 10之一中所述的DNA聚合酶与引物、多核苷酸模板和核苷三磷酸接触，由此产生延伸的引物。