[发明专利]靶向VEGFR-2和DLL4的双靶向抗体及包含它的药物组合物

权利要求书

1.一种靶向VEGFR-2和DLL4的双靶向抗体。

2.根据权利要求1的双靶向抗体，其中所述抗体包含DLL4拮抗剂，该DLL4拮抗剂与结合VEGFR-2的抗体的末端结合。

3.根据权利要求2的双靶向抗体，其中所述结合VEGFR-2的抗体是Tanibirumab或其变体。

4.根据权利要求2的双靶向抗体，其中所述DLL4拮抗剂是人类Notch1的第十一和第十二钙结合EGF样结构域。

5.根据权利要求2的双靶向抗体，其中所述DLL4拮抗剂与结合VEGFR-2的抗体的轻链可变区N-末端结合。

6.根据权利要求5的双靶向抗体，其中所述DLL4拮抗剂通过氨基酸接头与结合VEGFR-2的抗体结合。

7.根据权利要求3的双靶向抗体，其中所述结合VEGFR-2的抗体包含：包含选自SEQ ID NO：1至3的序列的重链可变区，和包含选自SEQ ID NO：4至6的序列的轻链可变区。

8.根据权利要求7的双靶向抗体，其中所述结合VEGFR-2的抗体包括：包含SEQ ID NO：1的序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO：4的序列的轻链可变区；

包含SEQ ID NO：2的序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO：5的序列的轻链可变区；或

包含SEQ ID NO：3的序列的重链可变区，其包含SEQ ID NO：6的序列的轻链可变区。

9.根据权利要求4的双靶向抗体，其中作为DLL4的拮抗剂的人类Notch1的第十一和第十二钙结合EGF样结构域包含SEQ ID NO：7的序列。

10.编码根据权利要求1至9中任一项的双靶向抗体的DNA。

11.一种重组表达载体，包含根据权利要求10的DNA。

12.由根据权利要求11的重组表达载体转化的宿主细胞。

13.一种生产根据权利要求1至9中任一项的双靶向抗体的方法，包括培养根据权利要求12的宿主细胞，然后从培养物中分离双靶向抗体。

14.根据权利要求13的方法，还包括使用具有蛋白质A亲和色谱、SP琼脂糖凝胶色谱和大小排阻色谱的快速蛋白液相色谱法纯化所述双靶向抗体。

15.一种用于治疗血管发生相关疾病的药物组合物，包含根据权利要求1至9中任一项的双靶向抗体。

16.根据权利要求15的组合物，所述血管发生相关疾病是选自肿瘤生长、肿瘤转移、年龄相关的黄斑变性(ARMD)、糖尿病性视网膜病、银屑病、类风湿性关节炎和慢性炎症的组中的一种或多种。

17.根据权利要求16的组合物，所述癌症是选自结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、支气管癌、鼻咽癌、喉癌、胰脏癌、膀胱癌、胰腺癌、宫颈癌、脑癌、前列腺癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾癌、食道癌、胆道癌、睾丸癌、直肠癌、头颈癌、宫颈癌、输尿管癌、骨肉瘤、神经细胞瘤、黑色素瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤和神经胶质瘤的组中的一种或多种。

18.一种测量根据权利要求1至9中任一项的双靶向抗体的DLL4拮抗剂功效的方法，包括通过共培养表达人DLL4(hDLL4)的细胞系或具有人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的重组细胞系，测量Notch 1的活性。

19.根据权利要求18的方法，其中测量Notch 1的活性是通过测量NICD的表达量来实现的。

20.根据权利要求19的方法，其中测量NICD的表达量是通过使用选自SDS-PAGE、Western印迹、免疫组织化学染色法、免疫染色法、免疫荧光法、ELISA测定法(直接测量)和荧光素酶测定法来实现的。

21.根据权利要求18的方法，其中所述重组细胞系是过表达hDLL4的293细胞系(293-hDLL4)。

22.根据权利要求18的方法，其中所述共培养物包括(a)培养HUVEC；和(b)将过表达hDLL4的293细胞系(293-hDLL4)和双靶向抗体反应并在步骤(a)中培养的HUVEC中进行处理以实现共培养。