[发明专利]GM-CSF和IL-4轭合物、组合物以及与其相关的方法

说明书

在某些实施例中，本披露涉及包括GM‑CSF和IL‑4的轭合物以及与其相关的用途，例如增强免疫系统。典型地，GM‑CSF和IL‑4通过一种连接物连接。在某些实施例中，本披露涉及编码这些多肽轭合物的分离的核酸、包括编码多肽轭合物的核酸的载体以及包括这些载体的蛋白质表达系统，如包括这样的核酸的感染性病毒颗粒和宿主细胞。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年10月23日提交的美国临时申请号61/717,129的优先权，将其通过引用以其全文结合在此。

背景

癌症被认为是由于免疫系统未恰当地除去不受控制的增殖癌细胞的结果而发生。刺激免疫系统识别并消除癌性细胞已经成为用于治疗性治疗的有希望的策略。(阿地白介素)包含被认为促进免疫系统对抗癌细胞的重组人白介素2(IL-2)并且被指定用于治疗成人的转移性肾细胞癌(转移性RCC)。在推荐的剂量下，严重的不良事件通常伴随这一疗法。因此，需要鉴定改进的方法。

细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)通过增强经由树突细胞(DC)进行的抗原呈递和共刺激来增强适应性免疫系统。归因于其免疫刺激作用，GM-CSF已经用于增加抗癌的宿主免疫系统并且对于化疗后患者而言，用于提升白细胞计数。Provenge^TM是一种FDA批准的自体细胞癌症免疫疗法治疗剂。经由白细胞去除术收获受试者的周围血液白细胞。将这些富集的单核细胞用前列腺酸性磷酸酶(PAP)孵育，该磷酸酶被轭合至粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(PAP-GM-CSF)。GM-CSF被认为将靶抗原引导至DC前体上的受体，这些DC前体然后将其细胞表面上的PAP在足以活化T细胞的背景下呈递给表达PAP的细胞。向受试者给予活化的PAP呈递DC，以引发阻碍癌症生长的免疫应答。这一策略需要从受试者分离并扩增细胞，并且典型地，治疗不能完全清除受试者的癌症或肿瘤。因此，需要鉴定改进的方法。

白介素4(IL-4)是一种γ-链细胞因子。它通过B淋巴细胞而作为活化并引发抗体类别转换的信号并且将天然辅助性T淋巴细胞转化为活化的T淋巴细胞并且然后扩增其群体。美国专利6,838,081报道了通过给予IL-4和GM-CSF的组合而增强从前体细胞形成抗原呈递细胞。还参见美国专利申请2004/0072299和Hikino(引野)等人，ANTICANCER RESEARCH(抗癌研究)24:1609-1616(2004)。

GIFT融合因子(fusokine)是来源于GM-CSF和常见γ-链白介素融合转基因的融合蛋白并且可以抑制或增强宿主免疫应答。Stagg(斯塔格)等人，Molecular Therapy(分子疗法)，2004，9，S133-S133披露了一种GM-CSF/IL-2融合物(GIFT2)。还参见Penafuete(佩纳弗艾特)等人，Cancer Res.(癌症研究)2009，69(23):9020-8；Rafei(拉菲)等人，Nat Med.(自然医学)2009，15(9):1038-45；Williams(威廉姆斯)和Park(帕克)，Cancer(癌症)，1991，67(增刊10):2705-7；WO 2005/0053579；WO 2005/026820；WO 2008/0014612；以及美国专利号7,323,549；7,217,421；6,617,135；以及5,108,910。

概述

在某些实施例中，本披露涉及包括GM-CSF的多肽和IL-4多肽的轭合物。典型地，该GM-CSF和IL-4经由连接物(例如，多肽)而连接。在某些实施例中，本披露涉及编码这些多肽轭合物的分离的核酸、包括编码多肽轭合物的核酸的载体以及包括这些载体的蛋白表达系统，例如包括此类核酸的感染性病毒颗粒和宿主细胞。