[发明专利]具有蛋白酶活性的多肽和编码它的多核苷酸

说明书

对序列表的引用

本申请包括一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

发明背景

本发明涉及具有蛋白酶活性的分离的多肽和编码这些蛋白酶的分离的核酸序列。本发明还涉及包含这些核酸序列的核酸构建体，载体和宿主细胞(包含植物和动物细胞)，以及生产和使用(尤其在动物饲料和洗涤剂中使用这些蛋白酶)这些蛋白酶的方法。

相关技术说明

本发明提供具有蛋白酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。

多年来，洗涤剂工业已经在洗涤剂配制品中应用了不同酶，最常用的酶包括蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶，每种酶适于除去不同类型的污物。除这些酶之外，洗涤剂组合物典型地包括成分的复合物组合。例如，大多数清洁产品包括表面活性剂体系、漂白剂或助洗剂。不管当前洗涤剂的复杂度如何，但是对于研发包括新的酶和/或酶共混物的新的洗涤剂组合物仍存在需要。

传统地，已经在升高的温度下进行洗涤，并且已经选择熟知的洗涤剂在较高的温度下进行。

对改进洗涤过程以便使得它们更环保的增加的聚焦导致如下全球趋势：降低洗涤时间、pH和温度，并且减少可能负面地影响环境的洗涤剂组分的量。因此存在希望，例如希望在较低温度下洗涤，并且因此对在不同条件下(例如在低温下)具有高性能的洗涤剂蛋白酶存在需要。

在动物饲料中使用蛋白酶(体内)，和/或这类的蛋白酶用于处理植物性蛋白(体外)的用途中，注意的是蛋白对于动物和人类是必需营养因子。大部分家畜和许多人从植物性蛋白来源获得这些必需蛋白。重要的植物性蛋白来源是例如油籽作物、豆类和谷类。

当例如大豆粉包含在单胃动物如猪和家禽的饲料中时，相当比例的大豆粉固体未被有效地消化(在小猪、生长猪和家禽如肉仔鸡、蛋鸡和公鸡中的表观回肠蛋白消化率仅是80％左右)。

动物的胃肠道是由一系列各自呈现不同pH环境的段组成。在单胃动物如猪和家禽以及许多鱼中，胃展现了低至pH 1-2的强酸性pH，而肠展现了在pH 6-7范围内的一个更中性的pH。除了胃和肠之外在胃之前家禽还具有一个嗉囊，该嗉囊中的pH主要取决于咽下的饲料并因此典型地处于pH 4-6的范围内。通过一种蛋白酶消化蛋白可发生在整个消化道中，假如该蛋白酶是有活性的并存活于该消化道的条件下的话。因此，以下这样的蛋白酶是特别令人希望的：它是高度地酸稳定的以在胃环境中存活，并且同时在靶动物的宽的生理pH下是有效地有活性的。

另外，动物饲料常常是以丸形式配制的，其中在该造丸过程中采用蒸汽。因此以下也是令人希望的，在动物饲料中使用的蛋白酶能在暴露于蒸汽处理之后保持活性。

在动物饲料中使用蛋白酶以改善饲料中蛋白的消化是已知的。WO95/28850披露了一种植酸酶与一种或多种微生物蛋白水解酶组合以改善植物性蛋白的溶解度。WO 01/58275披露了枯草杆菌蛋白酶家族的酸稳定性蛋白酶在动物饲料中的用途。WO 01/58276披露了与以下蛋白酶相关的酸稳定性蛋白在动物饲料中的用途：衍生自拟诺卡菌NRRL 18262(10R蛋白酶)的蛋白酶，连同衍生自白拟诺卡氏菌DSM 14010的一种蛋白酶。WO04/072221、WO 04/111220、WO 04/111223、WO 05/035747以及WO05/123911披露了与10R蛋白酶相关的蛋白酶及其在动物饲料中的用途。另外，WO 04/072279披露了其他蛋白酶的用途。WO 04/034776披露了一种枯草杆菌蛋白酶/角蛋白酶，来自地衣芽孢杆菌的PWD-1，在家禽饲料中的用途。WO 04/077960披露了一种通过采用一种细菌或真菌蛋白酶增加草料或谷物在反刍动物中的消化率的方法。

包含一种蛋白酶的并且销售以用于在动物饲料中使用的商业产品包含ProAct(DSM NP/诺维信公司(Novozymes))、(丹尼斯克公司(Danisco))、(丹尼斯克公司)、(丹尼斯克公司)、Allzyme^TM(奥特奇公司(Alltech))、(生物资源有限公司(BioResources,Int.)、Poultrygrow^TM(杰夫公司(Jefo))和DP100(诺伟思公司(Novus))。

发明概述

本发明涉及具有蛋白酶活性的一种分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：