[发明专利]使用MES和MOPS作为流动相改性剂从多峰树脂洗脱生物分子

权利要求书

1.一种用于纯化和富集生物分子的方法，所述方法包括如下步骤：

(a)提供包含所述生物分子的水溶液；

(b)将所述水溶液与多峰(multimodal)树脂接触；

(c)任选地用水性洗涤缓冲液洗涤所述多峰树脂；

(d)通过水性缓冲溶液从所述多峰树脂洗脱所述生物分子，

其中所述水性缓冲溶液包含如下的一种或多种：

(i)至少15mM的Good's缓冲液；

(ii)0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸；

(iii)0-400mM的盐酸胍、硫氰酸胍、氯化铵、硫酸铵、磷酸铵、乙酸铵、氯化钠、柠檬酸钠、辛酸钠、磷酸钠、碘化钠、氯化钾、柠檬酸钾、硫酸钾、磷酸钾、碘化钾、氯化镁、硫酸镁、磷酸镁、氯化钙、硫酸钙、磷酸钙或牛磺酸；和

(iv)1％-60％(v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物；

和

(e)收集包含生物分子的级分，由此获得纯化或富集形式的生物分子。

2.根据权利要求1的方法，其中所述水性缓冲溶液包含15mM至2.5M的Good’s缓冲液。

3.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述Good’s缓冲液是MES、MOPS或Tris。

4.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述Good’s缓冲液是MES。

5.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述Good’s缓冲液是MOPS。

6.根据权利要求1至5任一项的方法，其中所述生物分子是蛋白。

7.根据权利要求6的方法，其中所述蛋白是酶。

8.根据权利要求7的方法，其中所述酶是糖苷酶。

9.根据权利要求8的方法，其中所述糖苷酶是α-半乳糖苷酶。

10.根据权利要求9的方法，其中所述α-半乳糖苷酶选自下组：阿加糖酶(agalsidase)α和阿加糖酶β。

11.根据权利要求1至10任一项的方法，其中所述多峰树脂选自下组：Capto^TM Adhere、Capto^TM MMC、Pall PPA HyperCel^TM、Pall HEA HyperCel^TM、Pall MEP HyperCel^TM和HCX。

12.一种通过根据权利要求1至11任一项的方法获得的纯化的生物分子。

13.一种制备物，其包含：

(a)生物分子；和

(b)水性缓冲溶液，其包含如下的一种或多种：

(i)至少15mM的Good's缓冲液；

(ii)0-400mM的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸；

(iii)0-400mM的盐酸胍、硫氰酸胍、氯化铵、硫酸铵、磷酸铵、乙酸铵、氯化钠、柠檬酸钠、辛酸钠、磷酸钠、碘化钠、氯化钾、柠檬酸钾、硫酸钾、磷酸钾、碘化钾、氯化镁、硫酸镁、磷酸镁、氯化钙、硫酸钙、磷酸钙或牛磺酸；和

(iv)1％-60％(v/v)的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物。

14.根据权利要求13的制备物，其中所述水性缓冲溶液包含15mM和2.5M的Good’s缓冲液。

15.根据权利要求13或14的制备物，其中所述至少一种Good’s缓冲液选自下组：MES、MOPS或Tris。

16.根据权利要求13或14的制备物，其中所述Good’s缓冲液是MES。

17.根据权利要求13或14的制备物，其中所述Good’s缓冲液是MOPS。

18.根据权利要求13至17任一项的制备物，其中所述生物分子是蛋白。