[发明专利]卵巢和子宫内膜癌的帕帕尼科拉乌测试

说明书

最近开发的基于液体的帕帕尼科拉乌(Pap)涂片不仅允许进行细胞学评估，而且允许采集用于检测宫颈癌病原体HPV的DNA。本发明测试了这些样本，以检测存在于稀少的肿瘤细胞中的体细胞突变，该肿瘤细胞一旦从子宫内膜癌和卵巢癌中排出，可在宫颈中积累。收集子宫内膜癌和卵巢癌中一组常见突变的基因并用于鉴定所有46个子宫内膜或宫颈癌组织样本中的突变。本发明还能够鉴定来自100％的子宫内膜癌(24个中的24个)和41％的卵巢癌(22个中的9个)中的液体巴氏涂片的DNA中相同的突变。本发明开发了基于序列的方法，以在没有肿瘤基因型现有知识的情况下查询单个液体巴氏涂片中12种基因中的突变。

本发明利用美国国家癌症研究所和美国国立卫生研究院的基金进行。美国政府保留根据NCI协议N01-CN-43309和NIH资助CA129825和CA43460的条款的特定权利。

发明领域

本发明涉及癌症筛查领域。具体地，其涉及卵巢癌和子宫内膜癌。

发明背景

由于帕帕尼科拉乌测试(帕氏测试)的推行，在经筛查的人群中宫颈癌的发生率和死亡率已经降低了超过75％(1、2)。相反，在同一分期内由于卵巢癌和子宫内膜癌的死亡数并没有显著降低。结果，2012年在美国超过69,000名女性被诊断出卵巢癌和子宫内膜癌。虽然子宫内膜癌比卵巢癌更常见，但后者更为致命。在美国，预计每年有大约15,000和8,000名女性分别死于卵巢癌和子宫内膜癌(表1)。在世界范围内，仅今年就预计有超过200,000例由于这些肿瘤而死亡(3、4)。

为了复制宫颈癌筛查的成功，已经设计出几种早期检测子宫内膜和卵巢癌的方法。对于子宫内膜癌，工作已经集中于细胞学和经阴道超声(TVS)。在一些情况下，细胞学确实能够指示子宫内的赘生物，虽然具有低特异性(5)。TVS是基于包含癌症的子宫内膜比正常的子宫内膜厚的事实、测量子宫内膜厚度的无创技术(6)。和细胞学一样，由于良性病变如息肉也可导致子宫内膜变厚，因此利用TVS筛查测量子宫内膜厚度缺乏足够的特异性。因此，细胞学和TVS均没有满足筛查测试的要求(5,7)。

已经做出更大的努力来利用血清CA-125水平和TVS开发卵巢癌的筛查测试。CA-125是在具有早期疾病的卵巢癌患者亚组中增加的体腔和苗勒源上皮所表达的高分子量跨膜糖蛋白(8)。由于其也在多种良性状况，如盆腔炎、子宫内膜异位和卵巢囊肿中增加的事实，CA-125的特异性受到限制(9)。TVS可显现卵巢，但仅仅可检测大的肿瘤，且不能确定地区分良性肿瘤和恶性肿瘤。已经进行了几种利用血清CA-125和TVS的临床筛查测试，但均没有显示生存效益。实际上，与对照相比，一些已经显示发病率的上升，因为假阳性测试引出通过腹腔镜检查或剖腹探查术的进一步评估(10-12)。

因此，美国预防服务工作组、美国癌症学会、美国妇产科医师协会以及美国国家综合癌症网络，不建议在普通人群中常规筛查子宫内膜癌和卵巢癌。实际上，这些组织提醒“潜在危害大于潜在益处”(13-16)。已经对具有卵巢癌遗传素质的患者，例如BRCA基因种系突变的患者或具有Lynch综合征的患者进行这种建议的例外。建议在相对较早的年龄开始每6个月用TVS和血清CA-125筛查BRCA突变携带者。患有Lynch综合征的女性的筛查方针包括在30和35岁之间开始的每年子宫内膜取样和TVS(15、17)。

与未检测到的妇科恶性肿瘤有关的死亡率已经使得有效筛查工具的开发被优先考虑。启发目前的研究的重要观察发现是无症状的女性偶尔呈现在作为其常规宫颈癌筛查程序一部分的细胞学样本中检测到异常腺细胞(AGCs)。虽然在一些情况下AGCs与恶变前疾病或恶性疾病有关(18-22)，但通常难以将由宫颈内癌、子宫内膜癌和卵巢癌产生的AGCs相互区分或与更良性的状况区分。本领域依然需要在比目前所进行的更早的阶段检测这些癌症。

发明概述