[发明专利]抗-VEGF/DLL4双重可变结构域免疫球蛋白及其用途

权利要求书

1.一种包含第一和第二多肽链的结合蛋白，所述第一和第二多肽链各自独立地包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中

VD1是第一可变结构域；

VD2是第二可变结构域；

C是恒定结构域；

X1是接头；

X2是Fc区；

n为0或1，

其中所述第一和第二多肽链上的VD1结构域形成第一功能靶结合位点且所述第一和第二多肽链上的VD2结构域形成第二功能靶结合位点，且其中所述结合蛋白能够结合DLL4和VEGF，其中所述结合蛋白的第一多肽链包含SEQ ID NO: 56，且所述结合蛋白的第二多肽链包含SEQ ID NO: 64。

2.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含第一多肽链，所述第一多肽链包含第一VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中

VD1是第一重链可变结构域；

VD2是第二重链可变结构域；

C是重链恒定结构域；

X1是接头；

X2是Fc区；

n为0或1，且

其中所述结合蛋白包含第二多肽链，所述第二多肽链包含第二VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中

VD1是第一轻链可变结构域；

VD2是第二轻链可变结构域；

C是轻链恒定结构域；

X1是接头；

对于(X1)n而言，n为0或1；

对于(X2)n而言，n为0，

其中所述第一和第二多肽链上的VD1结构域形成第一功能靶结合位点且所述第一和第二多肽链上的VD2结构域形成第二功能靶结合位点。

3.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两条第一多肽链和两条第二多肽链以及四个功能靶结合位点。

4.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白的Fc区是来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的Fc区。

5.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白的第一多肽链包含SEQ ID NO: 74，且所述结合蛋白的第二多肽链包含SEQ ID NO: 73。

6.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含SEQ ID NO: 74和/或SEQ ID NO: 73的恒定区。

7.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白的第一和第二多肽链由SEQ ID NOs: 74和73组成。

8.权利要求1的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够：

(a) 如通过表面等离子共振所测定的，以至多7.0 x 10^-10 M的解离常数(K_D)结合至VEGF，和/或如在VEGFR1竞争ELISA中所测定的，以至多3.8 nM的IC50阻断VEGF活性；和/或

(b) 如通过表面等离子共振所测定的，以至多1.0 x 10^-8 M的解离常数(K_D)结合至DLL4，和/或如在Notch竞争ELISA中所测定的，以至多1.09 nM的IC50阻断DLL4活性。

9.一种结合蛋白缀合物，其包含权利要求1的结合蛋白，所述结合蛋白缀合物进一步包含药剂，其中所述药剂是免疫粘着分子、显像剂或治疗剂。

10.一种结合蛋白缀合物，其包含权利要求1的结合蛋白，所述结合蛋白缀合物进一步包含药剂，其中所述药剂是细胞毒性剂。

11.权利要求9的结合蛋白缀合物，其中所述显像剂是放射标记、酶、发光标记、磁性标记或生物素。

12.权利要求9的结合蛋白缀合物，其中所述显像剂是荧光标记。