[发明专利]付之鲎试验的抗凝血酶III用的前处理剂及前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及付之使用了鲎试剂的内毒素等靶标物质的检测试验的抗凝血酶III用的前处理剂和包含该处理剂的鲎试剂盒、以及使用了它们的抗凝血酶III的前处理方法和使用了鲎试剂的内毒素等靶标物质的测定方法。

本发明中，有时使用下述简称。

Et：内毒素

BG：(1→3)-β-D-葡聚糖

ATIII：抗凝血酶III

背景技术

内毒素是存在于革兰氏阴性细菌的细胞壁外膜上的脂多糖，且己知是强致热原。此外，己知的是，除了发热以外，内毒素还会引起休克症状等各种病状。因此，从确保医药品等的安全性的观点出发，注射剂等医药品、水、医疗器具等中的内毒素的检测、定量很重要。

己知的是，若革兰氏阴性细菌感染鲎，则会引起血液凝固，该现象被用于内毒素的检测。即，可以使用鲎血细胞提取液(鲎的变形细胞溶解物，下文中也称为“LAL”)测定内毒素。这被称为鲎试验，利用存在于LAL中的各种蛋白质(均为丝氨酸蛋白酶)的级联反应，该反应是通过内毒素与LAL接触而发生的。

ATIII为血液中的抗凝血因子，被用于弥散性血管内凝血(DIC)等的治疗。此处，由于ATIII为丝氨酸蛋白酶抑制剂，因此可抑制参与存在于LAL中的级联反应的蛋白质的活性(非专利文献1)。这样，有时通过待测试样而显示出对于鲎试剂的抑制作用。这种抑制作用有时可通过待测试样的稀释来避免(非专利文献2)。但是，ATIII对于鲎试剂的抑制作用极强，为了将ATIII制剂(注射剂)付之鲎试验，需要稀释64倍以上(非专利文献2)。由此，若考虑鲎试剂的检测灵敏度(校准曲线的最小内毒素浓度)，则认为难以将鲎试验适用于ATIII制剂(非专利文献2)。实际上，关于包含ATIII的试样，现在也利用兔发热试验进行内毒素的检测(非专利文献1)。

非专利文献1中公开了一种测定ATIII制剂的Et的方法，其特征在于，将ATIII制剂稀释100倍，在70℃加热20分钟进行前处理后，与LAL反应，通过光散射法进行测定。该方法的技术特征在于，为了使Et的检测高灵敏度化，代替使用分光光度计的比浊法而采用了使用光散射测定装置的光散射法。但是，该方法与上述同样地必须进行高倍率的稀释，而且至少还存在以下的问题。

(1)作为鲎试验的测定装置而广泛普及的是分光光度计，为了实施光散射法而需要另行新导入、使用光散射测定装置。

(2)在日本药典中，作为Et的光学定量法仅规定了比浊法和比色法，未规定光散射法。

另外，在专利文献1中记载了下述生物体来源的试样的Et及BG的测定方法，其特征在于，使生物体来源的试样与碱土金属硫酸盐或碱土金属卤化物接触，加热进行前处理后，付之使用鲎试剂的测定。

另外，在专利文献2中记载了下述血液来源的试样的Et及BG的测定方法，其特征在于，将生物体来源的试样与海地美铵(hexadimethrine)化合物、碱金属氢氧化物、非离子性表面活性剂及碱土金属卤化物混合，加热进行前处理后，付之使用鲎试剂的测定。

另外，在专利文献3中记载了下述有可能含有ATIII的试样的Et测定方法，其特征在于，使生物体来源的试样与固定有脂多糖和/或脂质A结合肽的载体接触，吸附回收Et后，付之使用鲎试剂等的测定。

但是，在所有文献中均未有关于下述内容的记载：为了实施ATIII的鲎试验，在与二价金属盐共存的状态下，将ATIII供至使蛋白质失活的处理中，进行前处理。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2006/080448号小册子

专利文献2：日本特开平6-70796

专利文献3：日本特开2010-243342

非专利文献

非专利文献1：内毒素·自然免疫研究15―飞跃的自然免疫研究―(エンドトキシン·自然免疫研究15―飛躍する自然免疫研究―)、医学图书出版、p.27～30、2012

非专利文献2：内毒素研究12―自然免疫学的新展开―(エンドトキシン研究12―自然免疫学の新たな展開―)、医学图书出版、p.93～97、2009

发明内容

发明要解决的问题