[发明专利]一种用于基因-药物治疗的新型试剂

说明书

本发明涉及一种用于以遗传物质转染细胞的组合物，其包括能够引导遗传物质远离细胞酸性区室的第一剂和能够稳定微管或其网络的第二剂。本发明还涉及所述组合物在制备用于治疗疾病的药物中的应用，一种用于递送遗传物质到细胞内的方法以及一种试剂盒。

相关申请交叉引用

本申请要求2012年10月29日提交的美国临时申请No.61/719,908的优先权，就所有目的而言，其内容通过引用整体地结合于本文中。

技术领域

本公开内容涉及用于以遗传物质转染细胞的组合物。特别是，本发明涉及使用组合物转染细胞，所述组合物包括能够引导遗传物质远离细胞酸性区室的第一剂和能够稳定微管或其网络的第二剂。

背景技术

pDNA、反义寡核苷酸和shRNA的基因递送为毁灭性疾病的治疗提供了可能，所述毁灭性疾病包括神经退行性疾病和脊髓损伤，对于这些毁灭性疾病，目前处治选择有限。然而，以基于核酸的治疗作为生物学的一个新类别仍然处于发展的初期阶段。基因递送的功效需要将这些分子递送到细胞内，递送策略存在巨大的挑战。考虑到与病毒载体临床应用有关的不足，因现有的非病毒载体转染分化神经元不佳，由于非病毒基因递送降低了免疫原性、可适应大尺寸转基因的能力、改善的安全性和便于制造的原因，其成为有吸引力的替代。

聚乙烯亚胺(LPEI)，一种现成的转染剂，已被用于转染各种类型的细胞，包括神经元的体内(in vivo)和体外(in vitro)的转染。人们认为LPEI将DNA 凝聚到纳米粒子中，由于LPEI的阳离子特性，通过结合到位于细胞表面的带负电荷的硫酸类肝素蛋白促进了这些载体进入细胞。人们认为内化后， LPEI/DNA纳米复合物被运输到细胞核周围区域。然后假设LPEI可以通过“质子海绵效应”逃离内体，将DNA从聚合物上释放，随后DNA被摄取进入细胞核。

目前，通过优化使用LPEI的实验方法来提高分化的神经元细胞的转染效率和细胞存活率的努力获得的成效有限。已经尝试在非神经元细胞、原代神经元和神经元细胞系中鉴定限制高转染效率的潜在机制。包括神经元细胞在内的非分裂的、有丝分裂后细胞的不良转染通常被认为是由于pDNA在核内转运中的推测缺陷。另外认为内化和细胞内的障碍限制了分化的神经元细胞的转染。通过提高摄取，发现更多的神经元细胞表达转基因，但是仅少量地 (总细胞数的2％至6％)。迄今为止，在分化的神经元中使用非病毒载体实现高转染效率的目标仍然很难，产生更多具有这种特性的新型聚合物的努力仍继续。

尽管对各种毁灭性疾病(如癌症、自身免疫性疾病和神经退行性疾病) 诊断上有了显著改进且处治上有了创新，但这些疾病的有效处治仍存在较多的挑战。目前，低的转染和递送效率限制了药物-基因治疗的应用。正是这种不满足的需求，要求开发方法以提高活体外和活体内的基因递送，随后采用这种技术开发盖伦制剂。

因此，本公开的目的在于改善上述不足，并提供改进的转染效率。

发明内容

第一方面，本发明提供了一种用于以遗传物质转染细胞的组合物，其包括能够引导遗传物质远离细胞酸性区室的第一剂和能够稳定微管或其网络的第二剂。

第二方面，本发明提供了一种将遗传物质递送到细胞内的方法，其包括借助组合物施用遗传物质的步骤。

第三方面，本发明提供一种组合物在制备用于治疗疾病的药物中的应用，所述疾病选自癌症、SMA、骨癌、白血病、血癌、镰状细胞疾病、Wiskott-Aldrich 综合征、HIV、遗传性疾病、糖尿病、心脏疾病和神经退行性疾病。

第四方面，本发明提供一种组合物，其包括如本文所描述的第一剂和如本文所描述的第二剂。

第五方面，本发明提供一种试剂盒，其包括如本文所描述的组合物和使用说明书。

术语定义