[发明专利]治疗剂的递送

说明书

产生包含针对致癌基因或原癌基因或其基因产物的寡核苷酸抑制剂的纳米囊泡的方法，所述方法包括a)将编码能够抑制人致癌基因性或原癌基因性转录因子(oncogenic or proto‑oncogenic transcription factor)的寡核苷酸的DNA序列引入哺乳动物细胞；b)允许细胞表达所述抑制剂寡核苷酸；以及c)从所述细胞获得包含所述抑制剂寡核苷酸的纳米囊泡。由要求保护的方法产生的纳米囊泡可有效并特异地靶向例如癌细胞以递送抑制剂寡核苷酸。

发明领域

本发明涉及通过细胞来源的囊泡递送潜在的治疗剂。

发明背景

癌症是全世界死亡的主要原因。2008年，根据世界卫生组织(WHO)，各种癌症导致了760万例死亡(约所有死亡例的13％)，并且这个数字预计将继续上升，估计在2030年全世界有1310万死亡例[GLOBOCAN 2008(IARC)Section of Cancer Information(11/11/2012)]。

恶性黑色素瘤是由皮肤肿瘤引起的大多数死亡的原因，并且是年轻人中最常见的恶性肿瘤。当黑色素瘤是转移性的时，预后不利，且治疗可选方案很少。葡萄膜黑色素瘤具有不同于皮肤黑色素瘤的临床特征，并经常主要传播至肝。对于葡萄膜黑色素瘤，已指出大约一半的患者在眼部原发性肿瘤治疗后的15年内将发展转移病灶。肝转移诊断后的平均存活时间为8至10个月，且具有葡萄膜黑色素瘤的肝转移的患者的死亡率在两年中是92％。一种治疗选择是对肝部局部灌注过高温度(hyperthermia)和溶肉瘤素(melphalan)。然而，这种方法极具侵入性并与手术并发症的风险相关。尽管在大多数病例中观察到缓解，但是存活期仅稍许延长。

皮肤的黑色素瘤和葡萄膜黑色素瘤仅仅是每年夺走数百万人的生命的癌症的两个实例。因此，癌症治疗是现代医学面对的主要挑战之一。

总体上，目前的抗癌治疗策略包括外科手术、放射治疗、细胞毒性药物(化疗)和激素药物。化疗剂的缺点是，它们是非选择性的并引起不良的副作用，该不良的副作用有效地限制剂量并因此还限制治疗效果。存在对改进的、更有选择性的癌症疗法的需要。

直接靶向点突变致癌基因的药物的罕见实例是维罗非尼(vemurafenib)，其特异性地靶向皮肤黑素瘤中常见的BRAF^V600E突变，与化疗相比具有相对较少的脱靶效应(off-target effect)。然而，这种治疗在转移性黑色素瘤中仅使寿命延长几个月，且仅在具有该特定突变的那些黑色素瘤中有效。因此，一种可能性将是，靶向下游的信号转导分子。然而，下游靶标缺乏酶活性，并且由于其三级结构，常常不可能用小分子治疗。另外，由于小分子抑制剂会遍及全身分布，其也会在依赖这些下游分子的正常的健康细胞中引起全身性副作用。

在过去十年中，基因治疗已经受到越来越多的关注，并认为在未来，基因治疗可应用于许多疾病，包括癌症。

基因治疗的最常见形式涉及使用编码功能性、治疗性基因的DNA来代替突变基因。其他类型的基因治疗涉及直接校正突变，或使用编码治疗性蛋白药物的DNA(而不是天然的人类基因)来提供治疗。还已提出，称为RNAi的RNA干扰对于开发针对例如，传染病或癌症的基因治疗可能是合适的。

自20世纪90年代末，已经知晓，RNAi是发生在许多真核细胞中的基因调控机制，且已被用作实现基因敲除的主要研究工具。

然而，发展基于RNAi的疗法和其他基因治疗应用的主要挑战是，治疗剂(例如，RNA分子)的递送。病毒载体可能是有效的，但是可能产生安全隐患，并且可被患者的免疫系统快速消除，降低其作用。

当靶标是对正常的健康细胞的功能也重要的基因或基因产物时，递送方式是特别重要的。因此，将药物以集中的方式递送至患病细胞特别地具有降低全身性副作用及其他细胞中的副作用的潜力。