[发明专利]新颖方法

说明书

发明领域

本发明涉及通过将TET家族基因、其衍生物或片段引入细胞以增强细胞效力的方法。本发明还涉及用于制备具有增强效力的细胞的方法和试剂盒，以及所述细胞的用途。

发明背景

据认为，干细胞的使用可以从根本上改变人类疾病的治疗。已知干细胞具有高水平的效力和自我更新，这意味着它们可以分化成多种细胞类型。这种有利的特性可以在器官和组织的产生或修复中使用。

胚胎干(ES)细胞的分离已经在干细胞技术和研究中带来很大进步。ES细胞是多能的，因此它们可被诱导分化成随后可被利用的多种细胞类型，例如，在科学动物模型或细胞移植疗法中使用。然而，ES细胞尚未满足它们作为在疾病的治疗中现在所面对的大多数问题的方案的预期。例如，已被证实的是，ES细胞的移植面临与当前器官移植一样的排斥问题。此外，鉴于在收获ES细胞期间胚胎遭到破坏的事实，这些细胞的使用引发了伦理问题。

最近，科学家已开发出产生诱导多能干(iPS)细胞(如WO2007/069666中所述)的方法，所述方法允许患者自身的体细胞去分化成多能状态，从而克服与ES细胞相关的伦理问题。然而，来自人和啮齿动物谱系之外的其它哺乳动物的iPS细胞和ES细胞在几乎所有的情况下都缺少完全的多能性。

此外，作为多能细胞，来自任何物种的ES和iPS细胞不能形成胚外谱系的组织，并且必须注射到宿主囊胚以产生完整的有机体。

WO2010/037001描述使用TET蛋白家族来调节和检测DNA的胞嘧啶甲基化状态以便重编程干细胞的方法。

因此需要产生具有更高效力的细胞(如全能细胞)以用于在干细胞技术中使用的方法。

发明概述

根据本发明的第一方面，提供增强细胞效力的方法，其中所述方法包括以下步骤：将TET家族基因、其衍生物或片段引入细胞中。

根据本发明的另一方面，提供制备具有增强效力的细胞的方法，所述方法包括以下步骤：将TET家族基因、其衍生物或片段引入细胞中。

根据本发明的另一方面，提供可通过本文所定义的方法获得的具有增强效力的细胞。

根据本发明的另一方面，提供包含SEQIDNO:11或13的TET3同工型的核酸。

根据本发明的另一方面，提供包含如本文所定义的核酸的载体。

根据本发明的另一方面，提供如本文所定义的核酸或如本文所定义的载体在增强细胞效力的方法中的用途。

根据本发明的另一方面，提供用于在疗法中的使用的如本文所定义的具有增强效力的细胞。

根据本发明的另一方面，提供试剂盒，所述试剂盒包括含有TET家族基因、其衍生物或片段的载体，和根据如本文所定义的方法来使用所述试剂盒的说明书。

附图简述

图1：5'Tet3基因座的示意图。图不是按比例绘制。虚线代表多个外显子和内含子。箭头表示用于启动子使用分析的qRT-PCR引物的位置(参见实施例部分)。所指示的起始密码子与全长TET3蛋白同框。‘Cat’＝催化结构域。

图2：启动子使用和编码CXXC的外显子的并入。示出了相对于参考基因Atp5b和Hspcb的平均值的转录水平。除了卵母细胞(其具有单个值)，所示的值是两个生物学平行测定值的平均值，范围被示出为误差线条。EB：胚状体。

图3：在由Tet3变体1转染的分选细胞中通过qPCR进行的候选基因的表达分析。示出了相对于参考基因Atp5b和Hspcb的平均值的转录水平。Mut：催化非活性突变体。

图4：在由Tet3变体1转染的分选细胞中通过qPCR进行的对照基因的表达分析。示出了相对于参考基因Atp5b和Hspcb的平均值的转录水平。Mut：催化非活性突变体。

图5：在由Tet3变体3转染的分选细胞中通过qPCR进行的候选基因的表达分析。示出了相对于参考基因Atp5b和Hspcb的平均值的转录水平。Mut：催化非活性突变体。

图6：由Tet3变体1转染的分选细胞中的表达水平的散点图。每个点代表单个基因。用黑色来指示通过qPCR检测的候选基因(参见实施例4)和几个家族成员，其中用箭头标记一些示例性基因。