[发明专利]双特异性EGFR/c-Met抗体

权利要求书

1.一种分离的双特异性抗体，其为表皮生长因子受体（EGFR）/肝细胞生长因子受体（c-Met）双特异性抗体，其包含：

a) 第一重链（HC1）；

b) 第二重链（HC2）；

c) 第一轻链（LC1）；和

d) 第二轻链（LC2），

其中所述HC1、LC1、HC2和LC2分别由氨基酸序列SEQ ID NO: 199、200、201和202组成。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，

其中所述抗体抑制NCI-H1975细胞系中胞外信号相关激酶1和2（ERK1/2）的磷酸化，其中与用包含重链3（HC3）和轻链3（LC3）的对照单价EGFR抗体以及包含重链4（HC4）和轻链4（LC4）的对照单价c-Met抗体的混合物抑制NCI-H1975细胞系中ERK1/2的磷酸化的IC₅₀值相比，所述抗体的IC₅₀值小至少60倍，其中

所述HC3与所述HC1、所述LC3与所述LC1、所述HC4与所述HC2、以及所述LC4与所述LC2分别具有相同的氨基酸序列，并且

通过夹心免疫测定法，将抗磷酸化ERK1/2抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的结合于非磷酸化和磷酸化ERK1/2的抗体用作检测抗体，在全细胞裂解物中测量ERK1/2的磷酸化。

3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其中所述抗体以2×10^-9M或更小的IC₅₀值抑制ERK1/2的磷酸化。

4.根据权利要求2所述的双特异性抗体，其中ERK1在残基Thr202和Tyr204处被磷酸化，并且ERK2在残基Thr185和Tyr197处被磷酸化。

5.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体在EGFR残基K489、I491、K467和S492处结合以SEQ ID NO: 73示出的氨基酸序列组成的EGFR且在残基PEFRDSYPIKYVHAF（SEQ ID NO: 238）和FAQSKPDSAEPMDRSA（SEQ ID NO: 239）处结合c-Met。

6.根据权利要求1或2中所述的双特异性抗体，其中

a) VH1包含分别由SEQ ID NO: 210、211和212示出的重链互补决定区（HCDR）1（HCDR1）、HCDR2和HCDR3；并且

b) VL1包含分别由SEQ ID NO: 213、214和215示出的轻链互补决定区（LCDR）1（LCDR1）、LCDR2和LCDR3。

7.根据权利要求6所述的双特异性抗体，其中

a) VH2包含分别由SEQ ID NO: 216、217和218示出的HCDR1、HCDR2和HCDR3；并且

b) VL2包含分别由SEQ ID NO: 219、220和221示出的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

8.根据权利要求7所述的双特异性抗体，其中所述VH1、所述VL1、所述VH2和所述VL2分别由SEQ ID NO: 189、190、193和194的氨基酸序列组成。

9.一种分离的合成多核苷酸，其编码权利要求1中描绘的HC1、HC2、LC1和LC2。

10.一种载体，其包含权利要求9所述的多核苷酸。

11.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求10所述的载体。