[发明专利]用于高效率且高通量产生转基因事件的改进的分割种子大豆转化

权利要求书

1.一种产生转基因事件的方法，该方法包括：

将切割工具插入大豆种子的种皮以形成第一子叶节段和第二子叶节段，其中所述种子包含胚轴；

用土壤杆菌接种包含部分所述胚轴的第一子叶节段，所述土壤杆菌包含至少一个转基因；并

培养经接种的子叶节段以在经转化的植物细胞中产生转基因事件。

2.权利要求1的方法，其中该方法还包括在接种所述第一子叶节段之前从所述第一子叶节段和第二子叶节段除去种皮。

3.权利要求1的方法，其中插入切割工具包括纵向切割胚轴以保留部分胚轴与每个子叶节段在一起。

4.权利要求3的方法，其中在插入切割工具之前大豆种子工具的胚轴有一未切割长度，且所述第一子叶节段的部分胚轴的长度是该大豆种子的胚轴的未切割长度的大约1/3至1/2。

5.权利要求4的方法，还包括切割所述第一子叶节段的部分胚轴至该大豆种子的胚轴的未切割长度的约1/3至1/2的长度。

6.权利要求3的方法，其中在插入切割工具之前该大豆种子的胚轴有一未切割长度，且所述第一子叶节段的部分胚轴的长度与该未切割长度相等。

7.权利要求1的方法，其中插入切割工具包括沿着该大豆种子的种脐纵向切割该大豆种子。

8.权利要求7的方法，还包括定位该大豆种子的外表面上的种脐，并在插入切割工具之前将切割工具相对于该大豆种子定向，使得切割工具与该种脐对齐。

9.权利要求8的方法，其中每个子叶节段包含部分种脐。

10.权利要求7的方法，其中该大豆种子具有延伸穿过所述种脐的纵轴，该纵轴将该大豆种子分为第一侧和第二侧，该方法还包括在插入切割工具之前握住该大豆种子的第一侧。

11.权利要求1的方法，其中插入切割工具包括在形成所述第一和第二子叶节段之前将切割工具推进到该大豆种子的胚轴内。

12.权利要求1的方法，其中该方法还包括从经培养的经接种的子叶节段产生完整、能育的大豆植物，其中该完整、能育的大豆植物包含所述转基因事件。

13.通过权利要求12的方法产生的完整、能育的大豆植物，其中该完整、能育的大豆植物的转基因事件包括所述转基因事件。

14.权利要求12的方法，其中该方法还包括产生所述完整、能育的大豆植物的后代，其中该后代植物包含所述转基因事件，并且该方法任选地包括从该后代植物产生大豆种子。

15.通过权利要求14的方法产生的后代植物，其中该后代植物包含所述转基因事件。

16.通过权利要求14的方法产生的大豆种子，其中该大豆种子从所述后代植物产生，且该大豆种子包含所述转基因事件。

17.权利要求14的方法，还包括产生后代植物，该方法还包括下述步骤：

(a)使所述完整能育的大豆植物与另一大豆植物杂交，

(b)从步骤(a)的杂交收获后代种子，其中该后代种子包含所述转基因事件，

(c)播种该后代种子，

(d)从该后代种子种植后代植物，该后代植物包含所述转基因事件，和

(e)从步骤(d)中种植的后代植物产生后续的后代植物，该后续的后代植物包含所述转基因事件。

18.权利要求1的方法，其中所述转基因选自下组：杀虫剂抗性基因、除草剂耐受性基因、氮利用效率基因、水利用效率基因、营养品质基因、DNA结合基因、以及可选择标志物基因。

19.一种产生转基因事件的方法，该方法包括：

将切割工具插入种子的种皮以产生包含部分胚轴的子叶节段，

用土壤杆菌接种该包含部分胚轴的子叶节段，所述土壤杆菌包含至少一个转基因，

培养该经接种的子叶节段而在经转化的植物细胞中产生转基因事件，以及

从该经培养的经接种的子叶节段产生完整、能育的植物，所述完整、能育的植物包含所述转基因事件。

20.权利要求19的方法，其中所述种子是双子叶植物种子。

21.权利要求19的完整、能育植物的后代植物，该后代植物包含所述转基因事件。