[发明专利]用于检测毛癣菌属与相关疾病的方法

说明书

本发明涉及毛癣菌属真菌（champignons du genre Trichophyton）在人或动物体内、在皮肤及其附件上的存在的检测。

本发明特别涉及检测毛癣菌属（Trichophytons）的方法，包括在皮肤或皮肤附件的样品中确定选自五种特定蛋白酶的至少一种蛋白酶的存在的步骤。本发明还具体涉及针对这些蛋白酶的单克隆抗体以及含有它们的诊断试剂盒。

毛癣菌属是在皮肤、头皮或指甲上生长并在人或动物体内引起皮肤癣菌病的寄生性真菌。例如在人体内，毛癣菌属可能导致在皮肤上的圆癣、在头皮上的头癣、在胡须区域上的脓癣或须癣以及在指甲上的甲癣。

这些疾病非常棘手，并可能导致其它严重的病理并发症。它们的难看且有时致残的外观还可能对受影响的人产生显著的负面心理影响。

目前存在治疗毛癣菌属在人或动物体内造成的疾病的治疗手段，但是这些治疗与进行的诊断的可靠性密切相关。

现在，皮肤或其附件的真菌疾病可能是由于除毛癣菌属之外的真菌，如酵母、霉菌或其它皮肤癣菌，在这种情况下将需要不同的治疗。此外，它们可能与皮肤或其附件的其它疾病或伤病混淆。例如，指甲的营养不良的临床症状如牛皮癣、外伤、指甲肿瘤（ungual tumor）、扁平苔癣和类似甲真菌疾病的细菌感染，并可能是混乱的来源。

因此至关重要的是能够做出准确的诊断，因为不准确的结果导致启动无效的治疗方案。

现在有多种诊断工具，但是都不能令人满意。特别是对于甲癣，已知六种不同的工具（Rothmund等人, 2012），其中两种是常用的：直接观察，其不确定性不可避免地导致诊断错误，以及培养病原体，这是长期和相当不切实际的过程，不能向每个人开放。还有NISSHO CORPORATION公司制造的免疫试剂盒，其优点在于使用快速容易，但是缺乏灵敏性并尤其缺乏特异性。事实上，通过使用检测存在于毛癣菌属细胞壁上的多糖的抗体来检测皮肤癣菌，但是也存在于许多其它皮肤癣菌上。

因此仍然需要快速、容易和特定地检测皮肤或其附件上、特别是在指甲上毛癣菌属的存在的解决方案，该解决方案克服了现有诊断工具的缺点。

这是本发明的目的，为了满足这种需要，本发明提出了使用选自二肽基肽酶V（dipeptidyl-peptidase V）、枯草杆菌样蛋白酶6（subtilisin-like protease 6）、枯草杆菌样蛋白酶7（subtilisin-like protease 7）、亮氨酸氨基肽酶1（leucine aminopeptidase 1）和亮氨酸氨基肽酶2（leucine aminopeptidase 2）的至少一种蛋白酶。

 本发明因此涉及选自二肽基肽酶V、枯草杆菌样蛋白酶6、枯草杆菌样蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一种蛋白酶用于检测在人类或动物皮肤或皮肤附件的样品中至少一种毛癣菌属的存在的用途。

特别地，本发明涉及检测至少一种毛癣菌属的存在的方法，包括确定在获自可能被毛癣菌属感染的人类或动物的皮肤或皮肤附件样品中存在选自二肽基肽酶V、枯草杆菌样蛋白酶6、枯草杆菌样蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一种蛋白酶的步骤。

受试和检测的毛癣菌属涉及皮肤和/或皮肤附件的疾病。

“附件”在本发明的含义中指的是含有高百分比角蛋白的任何保护性表皮附件、附器或覆盖物，例如体毛、头发和指甲。

有利地，在皮肤或其附件层次上存在这些蛋白酶的至少一种仅特定于毛癣菌属的存在。作为易于使用、特定于毛癣菌属的快速诊断工具的对象的该测定可以通过各种手段进行，由此能够非常快速地启动有效的、针对性的治疗。两种手段特别适合：通过质谱法和免疫检测的测定。

为了实施第二种手段，根据特定目的，本发明还涉及针对二肽基肽酶V、枯草杆菌样蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2的单克隆抗体或能够分别结合到二肽基肽酶V、枯草杆菌样蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2上的该抗体的片段，以及包含此类抗体的试剂盒。

图1描述了二肽基肽酶V的定量限定。

现在将详细描述本发明。

本发明因此涉及选自二肽基肽酶V、枯草杆菌样蛋白酶6、枯草杆菌样蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一种蛋白酶用于检测涉及皮肤和/或皮肤附件霉菌病的人类或动物皮肤或皮肤附件样品中至少一种毛癣菌属的存在的用途。