[发明专利]用于合成手性胺的工程化的生物催化剂和方法

权利要求书

1.一种工程化的多肽，所述工程化的多肽具有转氨酶活性，所述工程化的多肽包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性，并且与SEQ ID NO:2相比具有在选自X19、X21、X34、X53、X56、X73、X86、X88、X107、X113、X147、X155、X165、X171、X178、X233、X251、X259、X268、X277、X286、X312、X316、X317、X358、X366、X383、X399、X414、X415、X417、X426、X434和X450的残基位置处的一个或更多个残基差异的氨基酸序列，其中在残基位置X21、X56、X86、X88、X107、X113、X133、X147、X233、X286、X312、X316、X383、X415、X417和X434处的残基差异选自：X21H、X56A/C、X86C、X88H/Y、X107G、X113L/P、X147H/V、X233V、X286C/H、X312N、X316C/F/G/N/S/T、X383C/F/I/M/T、X415A/G/H/L/V、X417V和X434T。

2.根据权利要求1所述的工程化的多肽，其中在残基位置X19、X34、X53、X73、X155、X165、X171、X178、X251、X259、X268、X277、X317、X358、X366、X399、X414、X426和X450处的残基差异选自X19W、X34A、X53M、X73R、X155V、X165F、X171Q、X178W、X251V、X259V、X268A、X277A、X317L、X358K、X366H、X399A、X414I、X426R和X450S。

3.根据权利要求1或2所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列包含与SEQ ID NO:2相比选自X34A、X56A、X88H、X107G、X113L、X147H、X153C、X155V、X233V、X315G、X316N、X383I和X450S的至少一个或更多个残基差异。

4.根据权利要求1、2或3所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列还包含与SEQ ID NO:2相比选自X31M、X57F/L、X86N/S、X153A、X233T、X323T、X383V和X417T的一个或更多个残基差异。

5.根据权利要求4所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列包含至少与SEQ ID NO:2相比的包含以下的残基差异的组合：X34A、X56A、X57L、X86S、X88A；X153C、X155V、X163F、X315G、和X417T。

6.根据权利要求5所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列还包含与SEQ ID NO:2相比的残基差异X316N。

7.根据权利要求6所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列还包含与SEQ ID NO:2相比选自X31M、X57F、X323T、X383I/T、X415H和X450S的残基差异。

8.根据权利要求7所述的工程化的多肽，其中所述氨基酸序列还包含与SEQ ID NO:2相比选自以下的残基差异的组合：

X31M、X57F、X323T和X383V；

X31M、X57F、X107G、X113L、X233T、X415H和X450S；

X31M、X57F、X233V、X323T、X383I、X415H和X450S；以及

X31M、X57F、X147H、X323T、X383I、X415H和X450S。

9.根据权利要求1所述的工程化的多肽，其中所述转氨酶与SEQ ID NO:4的多肽相比具有至少1.2倍增加的稳定性，其中所述氨基酸序列包含与SEQ ID NO:2相比选自以下的一个或更多个残基差异：X34T、X107G、X113L、X147H、X155V、X233T/V、X323T、X383I/V和X450S。

10.根据权利要求1所述的工程化的多肽，其中所述转氨酶与SEQ ID NO:4的多肽相比在将化合物(2)转化成化合物(1)方面具有至少1.2倍增加的活性，其中所述氨基酸序列包含与SEQ ID NO:2相比选自以下的一个或更多个残基差异：X56A、X86S、X88H、X153C、X415H和X417T。