[发明专利]去除植物中遗传连锁的方法

权利要求书

1.一种用于去除植物或植物细胞中第一染色体上所存在的第一基因座A和第二基因座B之间遗传连锁的方法，

所述方法包括：

（a）提供至少一个植物细胞，其包含所述第一染色体和至少第二染色体，其中所述第一染色体包含所述第一基因座A和所述第二基因座B，其中所述染色体是同源的或者是各自的部分同源染色体；

（b）在所述第一染色体中引入双链断裂，其中所述第一染色体中的双链断裂引入至所述第一基因座A和所述第二基因座B之间，从而提供包含所述第一基因座A的第一染色体的第一部分、以及包含所述第二基因座B的第一染色体的第二部分，

和

在所述第二染色体中在第二染色体对应的基因座或位置上引入双链断裂，从而提供第二染色体的第一部分和第二染色体的第二部分；

以及

（c）采用步骤（b）获得的至少一个植物细胞，鉴定至少一个植物细胞，在其中第一染色体上的第一基因座A和第二基因座B之间的遗传连锁被去除；

其中，通过非同源末端连接，包含所述第一基因座A的第一染色体的第一部分被连接至第二染色体的第二部分，

并且，其中通过至少一种位点特异性核酸酶引入第一染色体中的双链断裂和第二染色体中的双链断裂，所述位点特异性核酸酶选自：锌指核酸酶、大范围核酸酶、TAL效应物核酸酶和CRISPR/Cas9系统的核酸酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤（c）中鉴定这样的植物细胞，在其中第一染色体上的第一基因座A和第二基因座B之间的遗传连锁被去除，并且其中包含所述第一基因座A的第一染色体的第一部分被连接至第二染色体的第二部分，并且其中第一染色体的第二部分被连接至第二染色体的第一部分。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第二染色体不包含和所述第一基因座A相同的基因座和/或不包含和所述第二基因座B相同的基因座。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中通过相同的位点特异性核酸酶、相同的锌指核酸酶、相同的大范围核酸酶、相同的TAL效应物核酸酶或相同的CRISPR/Cas9系统的核酸酶，引入第一染色体中的双链断裂和第二染色体中的双链断裂。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中第一染色体中引入不超过一个双链断裂，并且第二染色体中引入不超过一个双链断裂。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中

第一染色体包含所述第一基因座A和所述第二基因座B，其中所述第一基因座A和第一特征的期望性状连锁，以及所述第二基因座B和第一特征或第二特征的不期望性状连锁；以及

其中所述第二染色体不包含和所述第二基因座B相同的基因座，其中所述第二基因座B和所述第一特征或第二特征的不期望性状连锁。

7.根据权利要求6所述的方法，其中第一或第二特征的不期望性状是选自如下的性状：对第一特征的期望性状有负面影响的性状、降低产量的性状、降低对疾病或害虫抗性的性状、降低生长的性状、降低尺寸的性状、降低种子的量的性状、降低对胁迫耐受的性状，所述胁迫包括盐、热、冷、水和干旱胁迫。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法还包括

（d）从权利要求1步骤（b）或步骤（c）之后所获得的植物细胞再生植物；

（e）通过自交或者和另一植物进行杂交，从所述再生植物中产生种子；以及

（f）从步骤（e）获得的种子来培养植物。

9.根据权利要求8所述的方法，其还包括筛选步骤（f）获得的所述植物是否去除遗传连锁。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中所提供的植物细胞是植物体细胞。

11.根据权利要求10所述的方法，其中植物体细胞是原生质体。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其中植物细胞是获自杂种的。