[发明专利]免疫原性裂解物的制备方法、获得的裂解物、负载有该裂解物的树突状细胞以及含有该裂解物或树突状细胞的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种从间皮瘤肿瘤细胞中制备免疫原性裂解物的方法，如此获得的裂解物，以及负载有所述裂解物的树突状细胞。此外，本发明还提供了一种含有该裂解物或树突状细胞的药物组合物。而且，本发明还提供了所述裂解物、树突状细胞或药物组合物在预防或治疗间皮瘤中的应用。

背景技术

胸膜腔的恶性间皮瘤是一种高致命的肿瘤。从症状发作起，平均存活持续时间为9-15个月，预后较差。到目前为止，没有标准的根治性治疗(curativetherapy)恶性胸膜间皮瘤(下称：间皮瘤)的手段。如胸膜切除术和胸膜外全肺切除术的手术方法会导致高的局部复发率和可疑的生存希望(questionablesurvivalbenefit)。唯一经美国食品和药物管理局(FDA)核准的治疗为培美曲塞(pemetrexed)(艾宁达Alimta)/顺铂，具有三个月的平均生存希望。由于目前治疗方式的有限成就，迫切需要新的治疗方案。利用免疫系统的特异性和效力的可能性成为了癌症免疫治疗中与日俱增的兴趣的基础。一种激活患者免疫系统的方法是使用树突状细胞来呈现肿瘤相关抗原，从而产生抗肿瘤特异性的应答。

树突状细胞是位于机体与它所处的环境的战略性位置的高运动性和非常有效的抗原呈递细胞。在这些位置，它们收集抗原并将抗原输送到二级淋巴器官，在这里，它们指导和控制自然杀伤细胞，B和T淋巴细胞的活化，并有效地激活它们以对抗抗原[1]。该属性使得他们成为对癌症的治疗策略中有吸引力的候选者[2-3]。树突状细胞可以在体外大量的产生，绕过由免疫抑制肿瘤环境引起的抗原呈递缺陷[4-7]，并随后以成熟状态注入以诱导抗肿瘤应答[8-11]。

已发现，基于树突状细胞的免疫疗法在实验动物和人类的某些癌症，比如肾细胞癌、黑色素瘤、神经胶质瘤和肺癌中能够诱导保护性和抗肿瘤免疫性[12]。这在间皮瘤中也被证明。特别地发现，基于树突状细胞的免疫疗法在恶性间皮瘤的小鼠模型中的生存率和肿瘤生长的减慢上具有有益效果[13]。

基于这些在实验动物中的临床前发现，已启动临床试验来评估，在间皮瘤患者中，脉冲的树突状细胞诱导肿瘤特异性细胞毒性T细胞应答的安全性和可行性[14]。10例患者接受化疗(培美曲塞/顺铂)，然后进行三次自体肿瘤裂解物负载的单核细胞来源的树突状细胞的疫苗接种。如较早在小鼠中发现的那样，在接种树突状细胞疫苗之前化疗，以减少肿瘤负荷，从而潜在地增加接种的功效。从该研究中能够清楚的知道，在间皮瘤患者化疗后注射自体肿瘤裂解物负载的树突状细胞是安全和耐受性良好的。

但是，使用自体肿瘤细胞裂解物负载树突状细胞具有一定的理论和实际的缺点。与自体的途径相关联的一个关键问题是，来自于胸恶性肿瘤的切除肿瘤材料的肿瘤细胞，特别是间皮瘤(胸水或活组织检查)的数量是非常有限的。作为一个例子，第一次使用树突状细胞的基于免疫治疗间皮瘤的人临床试验中，大多数患者被排除参与[14]。在总数为57位的间皮瘤患者中，只有10例患者能提供足够的肿瘤材料，虽然所有患者在CT/MRI扫描中有高肿瘤负荷。

此外，从患有间皮瘤的患者获得的自体肿瘤材料在肿瘤总数上是非常不同的，并被其它细胞“污染”。这导致高度可变的肿瘤细胞裂解物，使得标准化非常困难。当这样的肿瘤材料被负载到自体树突状细胞时，表型和刺激能力的不同结果是可以预见的。此外，为每个单独的患者制备自体肿瘤材料是费时费力的。此外，还需要对每个病人的裂解物批次进行质量检测，使得基于自体肿瘤裂解物的树突状细胞的免疫治疗过程是非常昂贵的。

与使用自体间皮瘤肿瘤细胞相关联的另一局限是在体外操作肿瘤来源的细胞的难度。用以优化制备肿瘤细胞衍生物(凋亡或坏死碎片)、增加免疫原性或通过蛋白质分级富集、以及其他重要的以增加疗效的步骤的不同方法不能直接在肿瘤的自体材料上进行实施。离体培养自体细胞直到细胞数量足够用以操纵是不合适的，因为即使进行短期培养间皮瘤细胞，大多数也未能产生细胞系。另一个使用自体肿瘤细胞是不可行的原因是需要相对长的培养周期，而在此期间，患者的疾病会进一步发展。

在现有技术中，已有建议使用凋亡的同种异体间皮瘤肿瘤细胞用于负载自体树突状细胞。在这方面，参考了Ebstein等人2003年在AmericanJournalofRespirationandCriticalCareMedicine杂志上的文章。在本文中，将来源于一种细胞系的完整凋亡的、同种异体间皮瘤肿瘤细胞用于体外研究，其中自体树突状细胞负载有所述完整凋亡的肿瘤细胞。