[发明专利]阿片样物质受体的正向变构调节剂和沉默变构调节剂

权利要求书

1.鉴定μ阿片样物质受体正向变构调节剂的筛选方法，其包括以下步骤：

(i) 将正向变构调节剂测试化合物和低浓度的μ选择性正构激动剂单独或与式I (BMS-986123)代表的沉默变构化合物共同添加至细胞；

(ii) 测量所述μ选择性正构激动剂和所述测试化合物单独或在所述式I化合物存在的情况下对所述细胞的效应；和

(iii) 如果通过所述测试化合物的正向变构激动剂活性的降低证明所述式I的化合物显示与所述测试化合物的竞争性结合，则将所述测试化合物鉴定为是正向变构调节剂。

2.根据权利要求1的方法，其中μ选择性正构激动剂的低浓度选自：

(a) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC80；

(b) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC70；

(c) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC60；

(d) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC50；

(e) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC40；

(f) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC30；

(g) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC20；

(h) 在所述细胞中小于或等于约计算的EC10。

3.鉴定μ阿片样物质受体负向变构调节剂的筛选方法，其包括以下步骤：

(i) 将负向变构调节剂测试化合物和高浓度的μ选择性正构激动剂单独或与式I (BMS-986123)代表的沉默变构化合物共同添加至细胞；

(ii) 测量所述μ选择性正构激动剂和所述测试化合物单独或在所述式I化合物存在的情况下对所述细胞的效应；和

(iii) 如果通过所述测试化合物的负向变构激动剂活性的降低证明所述式I的化合物显示与所述测试化合物的竞争性结合，则将所述测试化合物鉴定为是负向变构调节剂。

4.根据权利要求3的方法，其中μ选择性正构激动剂的低浓度选自：

(a) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC10；

(b) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC20；

(c) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC30；

(d) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC40；

(e) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC50；

(f) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC60；

(g) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC70；

(h) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC80；

(i) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC90；和

(j) 在所述细胞中大于或等于约计算的EC100。

5.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是U2OS细胞。

6.根据权利要求5的方法，其中，除了融合至OPRM1的C末端的β半乳糖苷酶的突变的氨基末端片段以外，所述细胞重组表达融合至β-抑制蛋白2的C末端的β半乳糖苷酶的N末端缺失突变体。

7.根据权利要求6的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是内吗啡肽-I。

8.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是CHO细胞。

9.根据权利要求8的方法，其中所述细胞重组表达人μ阿片样物质受体(CHO-μ)。

10.根据权利要求9的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是内吗啡肽-I。

11.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是C6神经胶质瘤细胞。

12.根据权利要求11的方法，其中所述细胞重组表达人μ阿片样物质受体(C6-μ)。

13.根据权利要求12的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是DAMGO。