[发明专利]HCV抗原-抗体组合测定和方法以及用在其中的组合物

权利要求书

1.下列试剂在制备用于通过以下方法组合检测试验样品中的HCV抗原和HCV抗体的试剂盒中的用途：

i. 能够结合生物素的固相，其包含与其结合的生物素化的抗-HCV抗体和第一生物素化的HCV抗原，所述生物素化的抗-HCV抗体选自单克隆抗体AOT3、C11-3、C11-7、C11-9和C11-14，所述第一生物素化的HCV抗原由SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99，或SEQ ID NO:101的氨基酸序列组成，其中所述生物素化的抗-HCV抗体结合所述试验样品中的HCV抗原，并且所述第一生物素化的HCV抗原结合所述试验样品中的抗-HCV抗体；和

ii. 第一可检测地标记的HCV抗原，其用于结合被所述第一生物素化的HCV抗原捕获的抗-HCV抗体；

其中，所述方法包括以下步骤：

a) 同时提供上述试剂；

b) 在一定条件下温育步骤(a)的试剂，由此：

i. 所述生物素化的抗-HCV抗体结合至所述固相并特异性地结合存在于所述试验样品中的HCV抗原，以产生捕获在所述固相上的生物素化的抗-HCV抗体-HCV抗原复合物；

ii. 所述第一生物素化的HCV抗原结合至所述固相并特异性地结合存在于所述试验样品中的抗-HCV抗体，以产生捕获在所述固相上的第一生物素化的HCV抗原-抗-HCV抗体复合物；和

iii. 所述第一可检测地标记的HCV抗原特异性地结合捕获在所述固相上的所述第一生物素化的HCV抗原-抗-HCV抗体复合物的抗-HCV抗体；

c) 将包含捕获的抗-HCV抗体和捕获的HCV抗原的固相与未反应的试验样品和试剂分离；

d) 使分离的固相与可检测地标记的缀合物抗体接触，所述缀合物抗体结合所述抗-HCV抗体-HCV抗原复合物的所述HCV抗原；和

e) 检测：

(i) 从所述可检测标记的缀合物抗体产生的第一信号，其中所述第一信号的存在指示HCV抗原在所述试验样品中的存在；和

(ii) 从所述第一可检测地标记的HCV抗原产生的第二信号，其中所述第二信号的存在指示抗-HCV抗体在所述试验样品中的存在。

2.根据权利要求1所述的用途，其中：

步骤(a)进一步包括：提供

iii. 第二生物素化的HCV抗原，其结合至不同于所述第一生物素化的HCV抗原的固相，并且结合存在于所述试验样品中的第二抗-HCV抗体；和

iv. 第二可检测地标记的HCV抗原，其用于结合所述第二抗-HCV抗体；

步骤(b)进一步包括：

iv. 所述第二生物素化的HCV抗原结合至所述固相且特异性地结合存在于所述试验样品中的第二抗-HCV抗体，以产生捕获在所述固相上的第二生物素化的HCV抗原-第二抗-HCV抗体复合物；和

v. 所述第二可检测地标记的HCV抗原特异性地结合捕获在所述固相上的所述第二生物素化的HCV抗原-第二抗-HCV抗体复合物的第二抗-HCV抗体；和

步骤(e)进一步包括：

检测从所述第二可检测地标记的HCV抗原产生的第三信号，其中所述第三信号的存在指示第二抗-HCV抗体在所述试验样品中的存在。

3.根据权利要求2所述的用途，其中：

步骤(a)进一步包括：提供

v. 第三生物素化的HCV抗原，其结合至不同于所述第一生物素化的HCV抗原和第二生物素化的HCV抗原的固相，并且结合存在于所述试验样品中的第三抗-HCV抗体；和

vi. 第三可检测地标记的HCV抗原，其用于结合所述第三抗-HCV抗体；

步骤(b)进一步包括：

vi. 第三生物素化的HCV抗原结合至所述固相且特异性地结合存在于所述试验样品中的第三抗-HCV抗体，以产生捕获在所述固相上的第三生物素化的HCV抗原-第三抗-HCV抗体复合物；和

vii. 所述第三可检测地标记的HCV抗原特异性地结合捕获在所述固相上的所述第三生物素化的HCV抗原-第三抗-HCV抗体复合物中的第三抗-HCV抗体；和

步骤(e)进一步包括：

检测从所述第三可检测地标记的HCV抗原产生的第四信号，其中所述第四信号的存在指示第三抗-HCV抗体在所述试验样品中的存在。