[发明专利]一株富含甘油酯型DHA的破囊壶菌Aurantiochytrium sp.及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物破囊壶菌Aurantiochytriumsp. CGMCC No. 8575，其脂质的主要成分为非极性脂质，其中DHA占总脂质含量高，可以获得高产量的甘油酯型DHA，适用于甘油酯型DHA的工业生产。 

背景技术

多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids，PUFAs）是保持人体健康重要的营养成分之一，特别是DHA和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acids，EPA)具有非常重要的医药应用和营养价值。 

在食品行业中，甘油酯型DHA可添加至牛奶或奶粉中，用作功能性营养物质。 

目前，DHA 的商业来源主要是海洋鱼油，沙丁鱼、鳍鱼等含有较高的脂肪组织，在很多国家都被用来生产鱼油，鱼油中DHA 的含量可以达到20-30%。但是以鱼油为原料生产DHA 具有很多缺点，如鱼油产量不稳定，成分复杂，含有鱼腥味，可能存在重金属污染。 

在海洋环境中，微生物如海洋微藻、真菌等才是DHA的原始生产者。在这些微生物中，DHA 的相对含量要远高于鱼油中的含量。 

破囊壶菌是一类异养的真菌类原生生物，近年来由于其广阔的生物技术应用前景而备受关注。破囊壶菌可以用来生产胞外酶、胞外多糖、类胡萝卜素、ω-3多不饱和脂肪酸如DHA和EPA，以及其他一些工业应用的生物活性物质。 

破囊壶菌的脂肪酸组成简单、培养条件成本低，利用破囊壶菌生产DHA，可以有效地解决鱼油DHA存在的问题。因此，作为多不饱和脂肪酸新的生产来源，破囊壶菌是极具潜力进行工业化生产DHA 的微生物。 

发明内容

本发明的目的在于提供甘油酯型DHA含量高的破囊壶菌Aurantiochytrium sp. CGMCC No. 8575，可用于工业化生产DHA，添加于牛奶、奶粉或保健品中。 

根据本发明，提供了一种甘油酯型DHA产量高，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（China General Microbiological Culture Collection Center, CGMCC），保藏编号为CGMCC No. 8575的破囊壶菌。该菌株的分类命名为Aurantiochytrium sp.；保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期为2013年12月13日。 

该菌株于2012年7月，分离自深圳大鹏湾沿海水域。分离方法的特点在于：采用不同的抗生素组合，利用松花粉垂钓选育。当破囊壶菌富集于松花粉边缘时，挑取松花粉粒，划线培养于琼脂平板上，3-5天后，挑取单菌落划线培养于新的琼脂平板上，以获得纯种破囊壶菌。根据此分离方法，从一个采样点共获得8株破囊壶菌。 

在本发明中，涉及破囊壶菌脂质的提取和分析。其特点在于：利用氯仿:甲醇=1:2体系的混合物作为抽提溶剂，提取细胞内的总脂质，通过气象色谱对结果进行分析，从而选育出DHA含量高的菌株，即Aurantiochytrium sp. CGMCC No. 8575。 

在本发明中，还包括破囊壶菌非极性脂质的分离鉴定。利用尼罗红染色，在荧光显微镜下观察显示，破囊壶菌Aurantiochytrium sp. CGMCC No. 8575胞内非极性脂质含量高，定量分析显示，冻干的破囊壶菌Aurantiochytrium sp. CGMCC No. 8575每克包含0.65-0.85g脂质，其中约有75%为非极性脂质，其中甘油酯型DHA约占总DHA的73%。 

根据本发明，破囊壶菌Aurantiochytrium sp. CGMCC No. 8575细胞内脂肪酸主要为DHA和十六烷酸，两者之和为脂肪酸含量的80-90%，即十六烷酸含量可达35-65%。高含量的十六烷酸说明该菌株也适用于生物柴油的工业生产。 

具体实施方式