[发明专利]一种用于抗肿瘤的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于抗肿瘤的siRNA及其应用，尤其涉及靶向人Pokemon基因的siRNA及其抗肿瘤作用，属于基因工程领域。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默过程。在这一过程中，dsRNA被核酸内切酶切割成小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)，siRNA与相关蛋白质结合成RNA诱导沉默复合体(siRNA-induced silencing complex，RISC)，RISC识别并降解靶信使RNA(message RNA，mRNA)，终止其参与的翻译过程，从而抑制基因表达。RNAi技术具有高度特异性、作用迅速、起效快等特点，可以有效减少毒副作用发生的可能，现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力。

Pokemon基因，即POK红系髓性致癌因子(POK erythroid myeloid Ontogenic factor)，也被称为LRF、OCZF或FBI-1，是转录抑制因子POK家族的一员，也是被发现的第一个对抑癌基因，可变读框基因(alterative reading frame，ARF)的特异性转录有抑制作用的因子，现已被确认为原癌基因。该基因主要通过调节ARF-p53路径，特异性抑制肿瘤抑制蛋白ARF及其激动剂，使细胞的增殖调控失效，从而导致肿瘤发生(Maeda T，Hobbs RM，Pier Paolo Pandolfi.Cancer Res，2005，65：8575-8578)。此外，Pokemon还位于多种肿瘤抑制基因和原癌基因的上游，在肿瘤转化分子网络机制中能控制其他癌基因的活性，并对肿瘤细胞的一些重要特性产生影响，被视为“肿瘤总开关”。例如，有研究表明，Pokemon为癌基因LAZ-3／BCL-6的潜在靶点，可与BCL-6协同作用促进淋巴瘤的发生发展；还可以反馈性增高人类肿瘤中广泛表达的凋亡抑制基因BCL-2的表达(Davies JM，Hawe N，Kabarowski J，et al.Oocogene，1999，18(2)：365)。Pokemon基因的编码产物，POK蛋白也可以介导蛋白二聚体形成，通过募集组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)引起染色质结构改变，引起特定DNA基因的开关，从而行使转录抑制功能。

Pokemon基因在人类多发性肿瘤，如淋巴瘤、肝癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌和膀胱癌等中均有高度表达，而缺失此基因的细胞则不易发生恶性转化。因此该基因有望成为肿瘤预防、诊断、治疗和预后评价的新靶标，能够特异性抑制Pokemon的药物，极有可能成为一种强有力的抗癌剂。

发明内容

本发明要提供的是一种能特异性抑制人Pokemon基因表达的siRNA，通过如下技术方案实现：

根据siRNA靶序列基本原则，针对人Pokemon基因(NM_015898)设计了1条21个核苷酸的siRNA靶点序列，即si-Pokemon，包括正义链和反义链，其碱基序列如下：

正义链5’-AAGCACUUUAAGGACGAGGdTdT-3’(SEQ ID NO：1)；

反义链5’-CCUCGUCCUUAAAGUGCUUdTdT-3’(SEQ ID NO：2)。

根据本发明的优选实施例，所述干扰片段的3’端还添加了两个呈单链悬挂结构的脱氧核糖核苷酸，以增强siRNA在体内和体外的稳定性，防止降解。

根据本发明的优选实施例，选择目前较为常见的阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂。

根据体外实验结果表明，本发明提供的siRNA能够抑制多种肿瘤细胞中人Pokemon基因的表达，可应用于制备抗肿瘤基因药物。优选实施例为人肝癌、乳腺癌和肺癌细胞。

本发明要提供的siRNA的应用，是指所提供的siRNA在制备对人Pokemon基因表达进行调节、调整或抑制的基因药物，特别是治疗人Pokemon基因过度表达所引起的疾病(如恶性肿瘤)的基因药物中的应用。

上述基因药物可通过静脉或皮下给药；所述药物可通过局部给药。

附图说明

图1为RT-QPCR检测人肝癌细胞株HepG2各实验组Pokemon基因的mRNA表达水平的结果图。

图2为RT-QPCR检测人肺癌细胞株A549各实验组Pokemon基因的mRNA表达水平的结果图。