[发明专利]一种基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器及制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器，其特征在于，以Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒和双功能化金纳米颗粒作为固相载体，所述Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒与氨基修饰的核酸适体结合形成磁性纳米颗粒-核酸适体复合物，然后再与双功能化金纳米颗粒杂交形成磁性纳米颗粒-核酸适体-双功能化金纳米颗粒复合物，最后与链霉亲和素标记的碱性磷酸酶结合，得到所述基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器；所述的Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒是经过羧基化并活化；所述双功能化金纳米颗粒表面修饰两种DNA序列，一种是巯基修饰的与核酸适体部分互补的DNA序列，另一种是巯基和生物素双修饰的与链霉亲和素标记的碱性磷酸酶特异结合的DNA序列。

2.权利要求1所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒，在所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒表面包覆一层硅壳，得到Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒，再对Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面羧基化修饰，得到羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒，之后进行羧基活化，得到活化的羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒；

步骤二、制备金纳米颗粒，在所述金纳米颗粒表面修饰两种DNA序列，一种是巯基修饰的与核酸适体部分互补的DNA序列，另一种是巯基和生物素双修饰的与链霉亲和素标记的碱性磷酸酶特异结合的DNA序列，得到双功能化金纳米颗粒；

步骤三、氨基修饰的核酸适体与步骤一制备的活化的羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒结合形成磁性纳米颗粒-核酸适体复合物；

步骤四、将步骤三制备的磁性纳米颗粒-核酸适体复合物与步骤二制备的双功能化金纳米颗粒杂交形成磁性纳米颗粒-核酸适体-双功能化金纳米颗粒复合物；

步骤五、链霉亲和素标记的碱性磷酸酶与步骤四制备的磁性纳米颗粒-核酸适体-双功能化金纳米颗粒复合物结合，得到所述基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器。

3.根据权利要求2所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器的制备方法，其特征在于，步骤一所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒采用软模板法制备，所述Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒经种子聚合法和经典法制备；所述Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面羧基化修饰是先将Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面氨基化，再利用丁二酸酐进行表面羧基化修饰；所述羧基活化为碳化二亚胺一步法活化羧基。

4.根据权利要求2所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器的制备方法，其特征在于，步骤二所述金纳米颗粒采用柠檬酸钠还原法制备。

5.根据权利要求2所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器的制备方法，其特征在于，步骤四所述杂交条件为37℃杂交45min。

6.权利要求1所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器在待测靶分子定性和定量分析中的应用。

7.一种权利要求1所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器在待测靶分子定性和定量分析中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：在所述基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器中加入待测靶分子，待测靶分子与核酸适体特异结合，将连接链霉亲和素标记的碱性磷酸酶的双功能化金纳米颗粒替换下来；之后磁分离，在上清液中加入化学发光底物，进行化学发光信号检测。

8.根据权利要求7所述的基于纳米颗粒和化学发光的核酸适体传感器在待测靶分子定性和定量分析中的应用方法，其特征在于，所述化学发光底物为AMPPD。