[发明专利]一种双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基及其发酵方法。

背景技术

益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。

乳酸杆菌和双歧杆菌在大量培养生产的情况下，培养基费用占生产成本比重大，而且生产成本难以降低。所以在生产制备菌体过程中，廉价经济的培养基显的格外重要。不同属的微生物培养所需的营养物质不尽相同，同时培养时容易产生拈抗作用。国内外也有少量文献报道双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵方法，但是都有其不足，例如成本太高、或活菌数太低等。因此，亟需一种低成本培养基混合发酵出高活菌数的方法。

发明内容

针对现有生产工艺的不足，本发明提供了一种乳酸杆菌和双歧杆菌的混合发酵培养基，及利用该培养基在优化条件下的混合发酵方法。

本发明提供了一种双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基，其原料及含量为：水溶性鱼粉，0.5-2g/L；水溶性大豆粉，1-5g/L；高氮玉米浆干粉，2-8g/L；高氮糖蜜酵母粉，30-50g/L；葡萄糖，10-20g/L；乳糖，1-2g/L；乙酸钠，0.1-0.3g/L；吐温-80，2-4g/L；柠檬酸铁铵，5-20mg/L；硫酸锰，5-15mg/L；氯化铁，30-50mg/L。

本发明所述乳酸杆菌和双歧杆菌混合发酵的方法，包括步骤：

(1)分别取乳酸杆菌、双歧杆菌在培养基中活化培养。其包括：乳酸杆菌的活化，取用试管保存的菌种一支，用2ml无菌水冲洗下菌体，吸取1ml菌液注入250ml容量瓶中的100ml活化培养基(即，本发明的双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基)中，37℃静置培养12h；双歧杆菌的活化，取用试管保存的菌种一支，用2ml无菌水冲洗下菌体，吸取1ml菌液注入250ml容量瓶中的100ml活化培养基(即，本发明的双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基)中，37℃静置培养16h；

(2)取步骤1的双歧杆菌接种到培养基上，接种量为1％，37℃培养14-22h；取步骤1的乳酸杆菌接种到培养基上，接种量为1％，37℃培养12-22h；

(3)将步骤2制备的双歧杆菌和乳酸杆菌按体积比1-3％∶1-5％的混合比例接种上罐，37℃，pH6.5，采用流加补料培养基，补料培养基中葡萄糖为上罐总用葡萄糖的2倍，发酵14-22h放罐。

优选的，本发明双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵方法中采用培养基配方如下：

115℃灭菌20min，待用。

上述双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵方法中，补料培养基中成分比为水溶性鱼粉∶水溶性大豆粉∶高氮玉米浆干粉∶高氮糖蜜酵母粉∶葡萄糖∶乳糖∶乙酸钠＝1∶1∶2∶15∶7∶1∶0.05，其中葡萄糖为上罐总用葡萄糖的2倍，其他成分按此比例基准换算。其中，上罐总用葡萄糖是指除补料外进罐的葡萄糖，如上罐发酵10L，总葡萄糖为140g，补料为其2倍，即280g。

本发明双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基(简称HFQ培养基)由以下成分组成：水溶性鱼粉，0.5-2g/L；水溶性大豆粉，1-5g/L；高氮玉米浆干粉，2-8g/L；高氮糖蜜酵母粉，30-50g/L；葡萄糖，10-20g/L；乳糖，1-2g/L；乙酸钠，0.1-0.3g/L；吐温-80，2-4g/L；柠檬酸铁铵，5-20mg/L；硫酸锰，5-15mg/L；氯化铁，30-50mg/L，初始pH6.0-7.5。利用本发明培养基对双歧杆菌和乳酸杆菌混合上罐培养，双歧杆菌和乳酸杆菌活菌数能达0.6-2.0×10¹⁰cfu/ml。本发明培养基成本低廉，制作过程简单，提高设备利用率，适合双歧杆菌和乳酸杆菌的工业化规模生产。

本发明所提供的双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵方法，特别适合双歧杆菌和乳酸杆菌相关微生态制剂的液体发酵生产，本发明方法的显著优点是：将双歧杆菌和乳酸杆菌进行混合上罐发酵，采用优化的培养基和优化的补料培养基成分、比例，充分发挥两种菌间的协同作用，降低生产成本，提高设备利用率。

附图说明

图1表示乳酸杆菌和双歧杆菌一级种子生长曲线；