[发明专利]白撮茄的高效再生培养体系

说明书

技术领域

本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种白撮茄的高效再生培养体系。

背景技术

茄子是一种重要的经济作物，其营养价值丰富，含有多种人体必需物质，每100g茄子中含有核黄素0.04mg、尼克酸0.6mg、维生素C5mg、维生素E1.13mg、铁0.5mg、锰0.13mg、锌0.23mg等。茄子在亚洲和非洲栽培广泛，目前，中国已经成为茄子最大的生产国，2011年年产量达2770万吨，是第二大生产国印度的两倍之多（FAO,2011）。在茄子生产栽培中很容易受到病虫害侵害，尤其是青枯病、黄萎病和枯萎病，发病严重时可造成茄子产量和品质的大幅下降。因此利用基因工程创造抗病、优质的茄子新品种具有重要意义。

为获得转基因植株受体系统必须具有高效稳定的再生体系。茄子再生已有相关报道Kamat,M.G et al.，1978；Guri,A et al.，1987；Franklin,G et al.，2004；Shivaraj,G et al.，余波澜等，2003，范适等，2005，曹必好等，2008，龚静等2011.)但在茄子再生过程中，出愈率低，愈伤组织生长状态不好，芽分化率不够高，转化率低等问题较为突出。因此，建立高效稳定的再生体系，对推动我国茄子基因工程育种研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种白撮茄的高效再生培养体系。本发明是以幼叶为外植体的白撮茄高效再生体系建立方法。

本发明涉及一种白撮茄的高效再生培养体系，包括如下步骤：

步骤一，培育白撮茄无菌苗；

步骤二，诱导愈伤组织；

步骤三，诱导不定芽；

步骤四，诱导不定根，生根移栽，获得白撮茄再生植株。

优选地，步骤一中，所述培育包括如下步骤：取生长饱满的白撮茄种子，于55℃水浴锅中浸种消毒15min，在室温条件下浸泡8h，以体积分数为2％次氯酸钠杀菌10min，无菌水漂洗3次，用无菌滤纸吸干水分，接种在无激素、pH值为5.8的MS培养基中，置于黑暗条件下发芽，温度设置白天30℃，夜间20℃，以打破种子休眠，种子长出1cm左右芽后，光照培养5-7天，待幼苗长出两片子叶，第一片真叶即将长出时，即得白撮茄无菌苗。

优选地，步骤二中，所述诱导愈伤组织使用的诱导培养基为：

MS+NAA0.1mg/L+ZT3.0mg/L，pH值为5.8。

优选地，步骤二中，所述诱导愈伤组织包括如下步骤：选取白撮茄无菌苗，切取子叶为外植体，子叶去除两端后剪成小块，正面向上平放于培养基进行诱导培养。

优选地，步骤三中，所述诱导不定芽使用的诱导培养基为：

MS+NAA0.1mg/L+ZT4.0mg/L+6-BA1.5mg/L+AgNo38.0mg/L，pH值为5.8。

优选地，步骤三中，所述诱导不定芽包括如下步骤：诱导愈伤组织10-14天后，得到幼嫩绿色愈伤组织，将其接种于诱导不定芽使用的诱导培养基中，进行不定芽的诱导。

优选地，步骤四中，所述诱导不定根使用的诱导培养基为：1/2MS培养基，pH值为5.8。

优选地，步骤四中，所述诱导不定根包括如下步骤：在不定芽诱导获得的幼苗长出2-3片真叶或幼苗为2-4cm长时，不带愈伤组织将其从基部剪断，接种不定根使用的诱导培养基进行不定根的诱导培养。

优选地，步骤四中，所述生根移栽为：幼苗进行不定根诱导培养15d后，有4-5片真叶，三条主根，若干条侧根，逐渐揭开瓶口通风，继续培养5d后即可移栽。

优选地，步骤二、三和四中，所述诱导的培养条件为：温度24±2℃；光照强度为1600lx，光照时间为16/24h。

本发明具有如下的有益效果：本发明采用幼叶作为茄子再生体系外植体，在含有NAA和ZT的愈伤组织诱导培养基上诱导出愈伤后，再在含有NAA、ZT、6-BA和AgNO3的芽诱导培养基上诱导生芽，再于1/2MS的生根培养基上诱导生根，得到生根小苗，按常规方法驯化移栽。本发明建立的再生体系，其愈伤组织诱导率可达97%左右，生芽率达到82%。继代生长良好，为茄子基因工程育种工作，提供了高效稳定再生体系。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1是以白茄无菌苗子叶为外植体进行组织培养。

图2是白茄无菌苗子叶分化形成愈伤组织。