[发明专利]一种辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及试剂盒领域，具体涉及一种辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒。 

背景技术

NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。 

NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。并且，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。 

发明内容

本发明旨在提供了一种辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒，采用该试剂盒进行的检测方法操作简单、快速、特异、灵敏，为检测者提供了质量优异的试剂及优化的操作程序，经过简单的培训，检测者就可胜任该项工作。 

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现： 

一种辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒，包括以下组成试剂： 

1）酸性提取液：吸取428ul的浓盐酸定容至50mL的酸性提取液，1瓶，4℃保存； 

2）碱性提取液：称取0.2g的NaOH定容至50mL的碱性提取液，1瓶，4℃保存； 

3）试剂一：称取0.715g HEPES和4.47mg EDTA，定容至15mL，用KOH调PH至8.0后制备的基质缓冲液15mL，1瓶，4℃保存； 

4）试剂二：40﹪乙醇液体4mL，1瓶，4℃保存； 

5）试剂三：称取12.47mgPMS于5mL棕色瓶中的粉剂，1瓶，-20℃保存； 

6）试剂四：称取4.26mgMTT于5mL棕色瓶中的粉剂，1瓶，4℃保存； 

7）试剂五：称取0.58mg乙醇脱氢酶溶于10mM PBS，pH=7.5，0.1%（W/V）BSA后制备的100U/mL乙醇脱氢酶液体1.8mL，1支，4℃保存； 

8）试剂六：称取7g NaCl定容至30mL的液体30mL，1瓶，4℃保存； 

9）试剂七：96﹪乙醇液体50mL，1瓶，4℃保存。 

本发明的有益效果是： 

1、本发明适用范围广：适用于植物、动物、细胞和微生物等所有材料； 

2、本发明检测灵敏度高：解决了样本中NAD(H)因为含量低、干扰多以致难以检测的问题，最低检测限达到10nm/L。 

3、本发明操作简便：采用分光光度计和酶标仪均可检测，缩短了反应时间；简化了反应步骤，可以规模化检测，在提高检测结果准确性和可靠性的同时，提高了检测效率。 

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明。本发明的具体实施方式由以下实施例详细给出。 

具体实施方式

下面将结合实施例，来详细说明本发明。 

一种辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒，包括以下组成试剂： 

1）酸性提取液：吸取428ul的浓盐酸定容至50mL的酸性提取液，1瓶，4℃保存； 

2）碱性提取液：称取0.2g的NaOH定容至50mL的碱性提取液，1瓶，4℃保存； 

3）试剂一：称取0.715g HEPES和4.47mg EDTA，定容至15mL，用KOH调PH至8.0后制备的基质缓冲液15mL，1瓶，4℃保存； 

4）试剂二：40﹪乙醇液体4mL，1瓶，4℃保存； 

5）试剂三：称取12.47mgPMS于5mL棕色瓶中的粉剂，1瓶，-20℃保存； 

6）试剂四：称取4.26mgMTT于5mL棕色瓶中的粉剂，1瓶，4℃保存； 

7）试剂五：称取0.58mg乙醇脱氢酶溶于10mM PBS，pH=7.5，0.1%（W/V）BSA后制备的100U/mL乙醇脱氢酶液体1.8mL，1支，4℃保存； 

8）试剂六：称取7g NaCl定容至30mL的液体30mL，1瓶，4℃保存； 

9）试剂七：96﹪乙醇液体50mL，1瓶，4℃保存。