[发明专利]对蒙古人种和高加索人种低免疫原性的、抗CD20的人抗体

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一个与CD20特异性结合，但对蒙古人种及高加索人种适用的、低免疫原性的人抗体分子实体及其应用。

本发明主要涉及通过基因工程手段将已经上市的奥法木单抗（Ofatumumab，Arzerra）进行基因工程改造，突变其恒定区会对蒙古人种产生高免疫原性的氨基酸，使得改造后的人抗体更适用于蒙古人种、高加索人种的基因表型。本发明还基于目前报道的奥法木单抗临床实验效果，优化了其CDC活性，更换其表达系统，使之该发明抗体较奥法木单抗在临床上具有更高的安全性。本发明还涵盖了该抗体在治疗肿瘤，尤其是CD20高表达的慢性淋巴瘤，非霍奇金氏淋巴瘤和大B细胞淋巴瘤中的应用。

背景技术

CD20（亦称为人B淋巴细胞限制性分化抗原）是前B细胞核成熟的B淋巴细胞上的疏水性跨膜蛋白（Valentine et al.,J.Bio.Chem.,1989,V264:11282-11287.）。CD20在早期前B细胞发育过程中表达并且持续表达至浆细胞分化时。研究发现，超过90%的非霍奇金氏淋巴瘤患者、慢性淋巴瘤患者及大B细胞淋巴瘤患者B细胞表面高表达CD20分子（Anderson et al.,Blood,1984,V63:1424-1433）,但造血干细胞、原B细胞、正常浆细胞及其它组织中并未发现前述特征（Tedder et al.,Immunology,1985,V135:973-979.）。基于此特征，Biogen公司于1997年上市了特异性针对CD20的人鼠嵌合型抗体利妥昔单抗（Rituximab，Rituxan），用于治疗慢性淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤等，并在临床上给患者带来了巨大的受益。Genmab公司随后在2009年上市了针对CD20其它区域的全人抗体奥法木单抗（ofatumumab），其第一个适应症批准用于氟达拉滨及阿伦珠单抗（alemtuzumab）治疗抵制的慢性B细胞淋巴瘤，目前该品种正在进行慢性淋巴瘤的一线治疗、非霍奇金氏淋巴瘤的一线治疗。

奥法木单抗与利妥昔单抗（Rituximab）的区别主要在于：1）尽管前述两抗体都特异性结合CD20，但两者结合CD20的位点不同；2）奥法木单抗较利妥昔单抗有更高的亲和力及CDC效应；3）奥法木单抗对某些基因如11q缺失的慢性淋巴瘤患者有效，而利妥昔单抗无效。因此奥法木单抗的上市将对利妥昔单抗在临床治疗上形成非常有效的补充。随着科学研究的进展，临床观察及荟萃分析，奥法木单抗在临床上也存在潜在的免疫原性问题，患者会发生获得性抵制,从而影响了奥法木单抗的治疗效果。这种获得性抵制主要是能随着奥法木单抗给药次数的增加患者机体产生了针对奥法木单抗的抗体。患者机体产生针对奥法木单抗的抗体，会由下述3种原因引起：（1）奥法木单抗由鼠杂交瘤NS0细胞生产，产品中含有Di-α1,3GalGal修饰的组分，这种组分在人体内会引起比较强的免疫原性（Jefferis.Nature Reviews Drug Discovery,2009,V8:226-234.）；（2）由患者基因多态性引起的免疫原性（Jefferis et al.,mAbs，2009，V1：1-7；P.Pandey.mAbs,2012,V4:553-554.），其中不同人种间基因多态性决定了奥法木单抗的治疗性抵制与不同患者个体间治疗效果的差异。另，由于奥法木单抗具有非常强的CDC效应，也在一定程度上影响了患者在临床上的适应性。

因此，针对一个很好靶点且已取得良好疗效的奥法木单抗，在临床治疗上仍存在进一步改良的、迫切的需要，以在临床上发挥更佳的临床效果，用于B细胞淋巴瘤治疗。

在该发明中，我们主要针对临床安全性进行如下的优化：1）奥法木单抗构建主要基于高加索人种免疫球蛋白G1m3同种异型氨基酸，这种选择使得奥法木单抗在用于蒙古人种的治疗时更容易因产生抗体而发生针对奥法木单抗的治疗性抵制。因此在该发明中突变其恒定区部分氨基酸使其适于蒙古人种及高加索人种；2）将NS0表达系统更换为CHO表达系统，降低或消除其Di-α1,3GalGal修饰的组分，使本发明单抗具有更低的免疫原性；3）在筛选细胞株时，筛选较奥法木单抗CDC活性略低的细胞株，从而使患者在临床上具有更好的适用性。

发明内容