[发明专利]载脂蛋白B抗血清的制备方法

权利要求书

1.一种载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）血清的预处理：将用于制备载脂蛋白B的血清通过浓度为6%-22%的多阴离子化合物和浓度为2-8mol/L的二价金属离子处理后获得低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白；

2）净含载脂蛋白B的低密度脂蛋白的提取：将获得的低密度脂蛋白依次经过生理盐水和0.5-1.1mol/L的草酸钾处理，离心过后取上层液进行透析获得低密度脂蛋白粗品，对低密度脂蛋白粗品用密度调节试剂进行密度调节，所述密度调节试剂为溴化钾，所述低密度脂蛋白调节后的密度范围为1.03-1.05g/cm³，调节完成后进行通过制备型超速离心机超速离心，所述超速离心的转速为40000-50000转/分，温度为8℃，再通过凝胶柱层析获得净含载脂蛋白B的低密度脂蛋白，在净含载脂蛋白B的低密度脂蛋白的提取过程中，采用的凝胶柱层析的凝胶为琼脂糖4B凝胶柱，收集主峰层析的物质即为净含载脂蛋白B抗原的低密度脂蛋白；

3）载脂蛋白B抗血清的制备：将载脂蛋白B作为抗原对绵羊进行免疫反应，制备载脂蛋白B抗血清，作用在绵羊上的净含载脂蛋白B的低密度脂蛋白，其密度选取为1.03-1.05g/cm、用量为每次5-9mg/每只绵羊。

2.如权利要求1所述的载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：所述血清中多阴离子化合物、二价金属离子和草酸钾残留的浓度依次分别为6%、0.3mol/L和0.03mol/L。

3.如权利要求1所述的载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：所述超速离心的次数为两次，所述低密度脂蛋白粗品在离心前均需通过溴化钾调节密度。

4.如权利要求1所述的载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：所述低密度脂蛋白在离心完成后通过添加防腐剂和海藻糖低温保存。

5.如权利要求4所述的载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：所述低温保存的温度为零下4℃至零下10℃。

6.如权利要求1所述的载脂蛋白B抗血清的制备方法，其特征在于：所述用于制备载脂蛋白B的血清均通过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗体以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体检测，且检测结果须呈阴性。