[发明专利]用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法

权利要求书

1.一种用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）血清的处理：将血清分成两部分，一部分作为基质血清，另一部分作为用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的组分，往用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的血清中加入浓度为6%-20%的多阴离子化合物，离心、沉淀低密度脂蛋白；

2）低密度脂蛋白的提取：将沉淀的低密度脂蛋白溶解，用草酸钾沉淀过剩的多阴离子化合物，离心后取上层清液，再次用生理盐水透析；

3）高密度脂蛋白的提取：取沉淀低密度脂蛋白之后的上层液，追加浓度为6%-20%的多阴离子化合物和浓度为2-8mol/L的二价金属离子，沉淀其中的极低密度脂蛋白，离心，取上层液再加入相同浓度的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取沉淀物加入草酸钾溶液沉淀多余的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取上层清液用生理盐水透析；

4）基质血清的处理：在基质血清中加入高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，调节载脂蛋白A1和载脂蛋白B的浓度，再加入柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖混匀溶解。

2.如权利要求1所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述低密度脂蛋白的提取和高密度脂蛋白的提取的步骤中，草酸钾的浓度为0.5-1.3mol/L。

3.如权利要求1所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述3）步骤中，沉淀了极低密度脂蛋白后的溶液，在加入多阴离子化合物和二价金属离子之后需在4℃下静置2小时。

4.如权利要求1所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述步骤4）中，载脂蛋白A1和载脂蛋白B调节后的最终浓度为2.5g/L。

5.如权利要求4所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述加入的柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖的质量比为柠檬酸三钠：丙氨酸：海藻糖=1：20：2。

6.如权利要求5所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：基质血清处理完成后需进行冷冻干燥，冷冻干燥后密封保存。

7.如权利要求6所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述血清中多阴离子化合物、二价金属离子和草酸钾残留的浓度依次分别为6%、0.3mol/L和0.03mol/L。

8.如权利要求1所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述2）和3）步骤中，提取获得的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均需通过免疫浊度法测量蛋白含量。

9.如权利要求1或8所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述制备的载脂蛋白A1和载脂蛋白B需通过世界卫生组织的国际参考物载脂蛋白A1 SP1-01和载脂蛋白B SP3-07作校准，按GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械  生物样品中量的测量  校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用载脂蛋白A1和载脂蛋白B免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。

10.如权利要求1所述的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其特征在于：所述用于制备载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的血清均通过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗体以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体检测，且检测结果须呈阴性。