[发明专利]一种牙齿盖髓剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及及组织再生材料研发领域，特别涉及一种牙齿盖髓剂及其制备方法。

背景技术

牙髓疾病治疗中活髓保存治疗是最符合生物学观点的方法，在其治疗中盖髓剂的作用至关重要。在目前所用的众多盖髓材料中，骨形态发生蛋白（Bone Morphogenetic Protein,BMP）是一直普遍关注的材料之一。有报道认为BMP用做盖髓治疗，短时期内便可形成大量修复性牙本质封闭露髓孔，有利于牙髓的恢复。但是，当BMP单独在体内应用时，很快就会被稀释或是被蛋白酶破坏，对牙髓细胞的作用时间短，不能有效的发挥其应有的生物性能；而且不能为牙本质形成提供支架，使其在临床应用中受到很大的限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牙齿盖髓剂及其制备方法，以rhBMP2-PLGA缓释微球材料作为牙齿盖髓剂，可以解决BMP在应用时的不足，既能起到缓释作用；又可以保护基因重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein-2(rhBMP-2)）的相关因子的活性，达到保护活髓的目的。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。

一种牙齿盖髓剂，其特征在于，所述牙齿盖髓剂为rhBMP2-PLGA缓释微球。

上述牙齿盖髓剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将先rhBMP2溶液加入到PLGA二氯甲烷溶液中，冰浴条件下超声乳化形成均匀的初乳，并用高速匀质机在10000r/min条件下进行搅拌；抽取搅拌后的初乳匀速注于PVA溶液中，均匀分散形成复乳；磁力搅拌，使二氯甲烷挥发完全后离心，收集沉淀物；去离子水反复洗涤后冷冻干燥,得作为牙齿盖髓剂的rhBMP2-PLGA缓释微球，4℃保存。

上述技术方案中，优选地，rhBMP2溶液的质量-体积浓度为0.1%（mg/ml），PLGA二氯甲烷溶液的质量-体积浓度为2.5%（mg/ml），PVA溶液的质量-体积浓度为1%（mg/ml），其中rhBMP2溶液、PLGA二氯甲烷溶液、PVA溶液的体积比为1：10:100。

本发明以rhBMP2-PLGA缓释微球作为牙齿盖髓剂，基因重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein-2(rhBMP-2)）为主体，以聚乳酸-羟基乙酸共聚物〔poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA〕为支架，解决了rhBMP-2在体内被快速稀释和被蛋白酶破坏的技术问题，具有缓释长效作用，保护基因重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein-2(rhBMP-2)）的相关因子的活性，形成新的牙本质，以达到保护活髓的目的。

此外，PLGA生物相容性较好、可生物降解、无毒性；而且其本身及其降解产物均对多肽类、蛋白等无明显的不良反应，安全可靠，并得到美国FDA的批准用于临床。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步详细说明。

图1为rhBMP2-PLGA缓释微球扫描电镜照片图。

图2为rhBMP2-PLGA缓释微球粒径分布图。

图3为rhBMP2-PLGA缓释微球的体外释放折线图。

图4为空白对照组实验结果图，图中无硬组织形成。

图5为rhBMP2组实验结果图，图中有牙本质钙化桥，但相对较少。

图6为rhBMP2-PLGA缓释微球组实验结果图，图中有牙本质生成，形成完整的钙化桥。

图7为胶原组实验结果图，图中可以观察到完整的牙本质桥形成；

图8为抗生素组实验结果图，图中有钙化的硬组织生成，但无完整的牙本质钙化桥。

图9为抗生素和rhBMP2-PLGA缓释微球混合组实验结果图，图中可以观察到有完整的牙本质钙化桥。

图10为胶原和rhBMP2-PLGA缓释微球混合组实验结果图，图中可以观察到有完整的牙本质钙化桥生成，且髓腔内无钙化。

图11为各组动物实验牙本质桥厚度的柱状图。

具体实施方式

本发明中，PLGA、PVA购买于SIGMA公司；rhBMP2购于上海瑞邦生物材料有限公司；rhBMP2ELISA检测试剂盒购于武汉博士德公司。采用（水包油、油包水）W/O/W复乳溶剂挥发法制备rhBMP2-PLGA缓释微球。

1、实验方法

（1）实验制备：