[发明专利]抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种基因干扰序列即抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA及其制备治疗和预防视网膜变性的药物中的应用。

背景技术

视网膜变性(Retinal degeneration)是由于视网膜细胞死亡引发的一系列眼睛疾病的统称，包括视网膜色素变性和年龄相关性黄斑变性等。临床主要表现为夜盲、管状视野及中心视力下降等。遗传因素在视网膜色素变性发病过程中发挥着重要作用，目前几无有效治疗方法。在发达国家，年龄相关性黄斑是引起50岁及以上人群重度视力丧失的首要原因。在我国，随着人口老龄化的加重，年龄相关性黄斑发病人数逐渐上升，因此其带来的危害正随着我国人口老龄化逐年增加。目前针对视网膜变性的治疗措施十分有限，而在分子水平上细胞凋亡是几乎所有视网膜变性的最终通路，因此抗细胞凋亡成为视网膜色素变性的治疗目标。

RNA干扰技术(RNA interferenc，RNAi)是通过小分子双链RNA(dsRNA)特异性靶向互补目标基因转录本，进而诱导目标基因mRNA降解达到基因沉默的技术。人工合成或细胞内转录生成小的双链RNA(siRNA)或者发夹型RNA(shRNA)进入细胞后与目的基因的靶序列结合，被Dicer酶切割使得目的基因mRNA被降解。RNAi特异高效的抑制目的基因的表达展现出广阔的前景。Josep Tabernero等将RNAi技术应用到人体实验中，研究者特异性的干扰VEGF和KSP的表达后，明显的抑制了肝癌的发生(Tabernero J，et a1.First-in-humans trial ofan RNA interference therapeutic targeting VEGF and KSP in cancer patients with liver involvement.Cancer Discov 2013，3：406-417.)。另外，RNAi技术还可以调节炎症反应，有报道证明RNAi 可能成为治疗急性肺炎的候选方案(Lomas-Neira J，et a1.，RNA interference as a potential therapeutic treatment for inflammation associated lung injury.Int J Clin Exp Med，2008，1：154-160.)。因此RNA干扰技术在医药领域有着广泛的应用。

发明内容

本发明提供了一种GADD45a基因的shRNA及其用途，该shRNA能够抑制GADD45a基因的表达，从而抑制光照诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡。

本发明抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA，根据GADD45a基因的mRNA序列，选择靶点序列，并根据靶点序列设计相应的shRNA系列，如下所示。

SEQ ID No.1：

5’-T AACGTCGACCCCGATAACGTGTTCAAGAGACACGTTATCGGGGTCGACGTT TTTTTTC-3’；

SEQ ID No.2：

5’-T AACATCCTGCGCGTCAGCAACTTCAAGAGAGTTGCTGACGCGCAGGATGTT TTTTTTC-3’；

SEQ ID No.3：

5’-T AAAGTCGCTACATGGATCAATTTCAAGAGAATTGATCCATGTAGCGACTT TTTTTTTC-3’。

本发明中，其序列如SEQ ID NO.1所示的抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA，其针对的靶序列如SEQ ID NO.4所示，即AACGTCGACCCCGATAACGTG。

本发明中，其序列如SEQ ID NO.2所示的抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA，其针对的靶序列如SEQ ID NO.5所示，即AACATCCTGCGCGTCAGCAAC。

本发明中，其序列如SEQ ID NO.3所示的抑制视网膜色素上皮细胞凋亡的shRNA，其针对的靶序列如SEQ ID NO.6所示，即AAAGTCGCTACATGGATCAAT。

本发明还公开了一种干扰GADD45a基因表达的载体，即可以转录形成该shRNA的载体，命名为pLL3.7-GADD45a-shRNA，该载体包含如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的序列构成的shRNA序列，具体步骤如下：