[发明专利]相转变分离纯化温敏性羟丁基壳聚糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种温敏性羟丁基壳聚糖的分离纯化方法，该方法适用于温敏性羟丁基壳聚糖衍生物的基础研究和大规模生产，该方法的使用摆脱了传统的浓缩沉淀方法无法有效沉淀的弊端，使温敏性羟丁基壳聚糖的大规模生产和质量控制成为可能。

背景技术

温敏性壳聚糖是一类对外界温度的变化刺激可以做出智能性响应的一类壳聚糖衍生物，其主要的特点是低温下为流动的液体，而当温度升高时，温敏性羟丁基壳聚糖可以发生智能性的相转变，转化为不流动的凝胶；其发生相转变的温度被称为最低临界溶液温度，该温度可以从10-37℃不等，且该温度可以调节。

温敏性壳聚糖发生相转变的机理主要是溶液体系中的各种物理作用力之间的动态平衡。即温敏性壳聚糖溶液体系中之间存在亲水-疏水、氢键以及范德华力等多种物理作用力，溶液体系中这三种作用力之间存在着一个动态平衡，共同维持着壳聚糖溶液体系的稳定，当温度升高时，氢键作用力被破坏，亲水-疏水作用占据主导地位，因而动态平衡被打破，溶液体系转变为凝胶体系。

目前温敏性壳聚糖主要包括羟丁基壳聚糖、壳聚糖-甘油磷酸盐以及PEG-壳聚糖等，在国内也有诸多专利开展上述工作，其中研究的热点为羟丁基壳聚糖，其主要原因是壳聚糖-甘油磷酸盐体系的最低临界溶液温度过高，不适合体内的拓展应用，且溶液-凝胶过程不可回复。羟丁基壳聚糖作为一种新型的壳聚糖衍生物，最近得到了飞速的发展，“一种温敏性壳聚糖衍生物-羟丁基壳聚糖的制备方法”（ZL200810033699.6）、“一种预防脑脊液漏的医用级温敏性羟丁基壳聚糖封闭剂的制备方法”（201110430139.6）等多项专利均涉及到羟丁基壳聚糖的制备及其应用。

羟丁基壳聚糖为一种两亲性高分子多糖，由于分子链中引入了亲水性基团-羟丁基，其水溶性明显改善，且乳化性能也得到了极大的改善。在羟丁基壳聚糖的产业转化过程中，产品的安全性是最重要的控制指标之一，而传统的工艺是对其进行分离纯化去除产品中的有毒杂质，最常用的方法为酒精分级沉淀，而低浓度下的羟丁基壳聚糖在酒精的溶解度大大提高限制了该方法的应用，因而针对上述难题提供一套科学完整的分离纯化方案是羟丁基壳聚糖产业转化中首当其冲的问题。而在国内公开或授权的专利中并没有出现专门针对温敏性羟丁基壳聚糖及其衍生物纯化的发明专利。

本发明专利为我们申请的有关羟丁基壳聚糖的系列专利之一，主要是为了解决产业转化过程中的实际难题，加强产品的质量控制，提高产品的安全性。

发明内容

本发明是针对低浓度温敏性羟丁基壳聚糖溶于酒精这一特殊现象，提供一套分离纯化的工艺流程。

为了实现以上目的，本发明提供一种纯化温敏性羟丁基壳聚糖的方法具体步骤如下：

第一步：分别配制不同浓度梯度的NaCl溶液，即低、中、高浓度，待用；

第二步：将浓度为0.1-5%（m/v）的温敏性羟丁基壳聚糖加入浓度为1-5%的NaCl溶液充分搅拌进行初级沉淀，；

第三步：将第二步得到的沉淀进行粉碎处理，然后放入浓度为10-15%的NaCl溶液中继续搅拌，进行二级沉淀；

第四步：将第三步得到的沉淀转入浓度为20-25% 的NaCl溶液中继续搅拌脱水进行三级沉淀，得到白色状沉淀，然后结固液分离，得到粗品；

第五步： 将得到的粗品通过有机溶剂的梯度洗脱去除NaCl，梯度分别为70%、80%、90%、100%得到粉状去盐沉淀；

第六步：粉状去盐沉淀40℃真空干燥去除有机溶剂和水分，得到温敏性羟丁基壳聚糖精制干粉。

通过上述步骤，可以有效去除小分子片段及副产物杂质，提高温敏性羟丁基壳聚糖的纯度。

本发明的优点：

1.本发明提供的方法解决了温敏性羟丁基壳聚糖低浓度溶液无法有机溶剂沉淀的难题

2.本发明提供的方法充分利用温敏性羟丁基壳聚糖的相转变机理，通过梯度NaCl溶液进行分级沉淀，达到了浓缩和纯化的目的。

3.本发明提供的方法提高了温敏性羟丁基壳聚糖的分子量并缩小了分子量的分布，达到了纯化的效果。

说明书附图

图1 纯化后的温敏性羟丁基壳聚糖FT-IR图谱

图2 未纯化前的温敏性羟丁基壳聚糖的分子量及其分子量分布

图3 纯化后的温敏性羟丁基壳聚糖的分子量及其分子量分布。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作了详细描述：

实施例一