[发明专利]PLDα1基因在增加作物抗旱性及种子产量中的应用

权利要求书

1.PLDα1基因在增加作物抗旱性及种子产量中的应用，其中，所述PLDα1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列相似性大于或等于70%。

2.一种增加作物抗旱性及种子产量的方法，其特征在于：将在气孔保卫细胞中特异性表达的启动子AtKat1_pro调控下的PLDα1基因，通过转基因手段将其整合到作物基因组中，所述在气孔保卫细胞中特异表达的启动子AtKat1_pro，其基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一种增加油菜抗旱性及种子产量的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）种子的灭菌及萌发：将油菜种子灭菌消毒后播种到M₀培养基中，25℃下暗光培养5天得幼苗；

2）农杆菌的培养：挑取含有从模式植物拟南芥中克隆的PLDα1基因质粒的农杆菌单菌落，将农杆菌单菌落放到含50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中培养1-2天，离心，倒掉上清，用等体积的DM溶液重悬菌体并将菌液稀释10倍；

3）外植体的制备和侵染：切取步骤1）的幼苗的下胚轴，将其在步骤2）配制好的菌液中侵染30min，使切口充分和菌液接触；

4）愈伤组织的培养：将侵染后的外植体转到已灭菌的吸水纸上，待残留的菌液吸干后将外植体转到M₁培养基中，25℃下暗光培养2天；然后转移到M₂培养基中，在25℃下光照培养3周；再转移到M₃培养基中，以后每2-3周继代一次，直至长出绿芽；将绿芽切下并转入到M₄培养基中，生根2-4周，得转基因油菜幼苗并将其移栽到大田，

其中，各培养基和DM溶液的配方及PH值如下：

M₀培养基：2.2g/L MS粉末，10g/L琼脂粉，pH值为5.8-6.0；

M₁培养基：4.4g/L MS粉末，30g/L蔗糖，18g/L甘露醇，1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，0.3mg/L激动素，100μM乙酰丁香酮，6g/L琼脂糖，pH值为5.8；

M₂培养基：4.4g/L MS粉末，30g/L蔗糖，18g/L甘露醇，1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，0.3mg/L激动素，30μM硫代硫酸银，300mg/L羧苄青霉素，25mg/L卡那霉素，6g/L琼脂糖，pH值为5.8；

M₃培养基：4.4g/L MS粉末，10g/L葡萄糖，0.25g/L木糖，0.6g/L2-（N-吗啉代）乙磺酸，2mg/L玉米素，0.1mg/L吲哚乙酸，300mg/L羧苄青霉素，25mg/L卡那霉素，6g/L琼脂糖，pH值为5.8；

M₄培养基：4.4g/L MS粉末，10g/L蔗糖，300mg/L羧苄青霉素，9g/L琼脂粉，pH值为5.8；DM溶液：4.4g/L MS粉末，30g/L蔗糖，100μM乙酰丁香酮，pH值为5.8。