[发明专利]一种判断花鲈养殖水体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种判断花鲈养殖水体的方法，其可以确定所检测花鲈是淡水还是海水养殖的产品。 

背景技术

花鲈(Lateolabrax japonicus)为近海中下层经济鱼类，也是目前海水主要养殖种类，该鱼病害少、生长快、易捕捞、产量高、效益好、肉质嫩、味道美、营养丰富，有生肌补血和滋补强身等保健作用，深受人们喜爱。经过淡化和驯养，花鲈也开始淡水中大面积养殖。

包括花鲈在内的广盐性鱼类，其在淡水养殖和海水养殖的鱼类品质存在差异，商品价格也有差异，因此需要建立一种鉴别此鱼类是淡水养殖还是海水养殖产品的技术方法，以防淡水鱼冒充海水鱼的出现，从而保障消费者权益；而目前还没有关于此类技术方法的报道。

催乳素受体基因（prolactin receptor,PRLR）参与鱼类适应盐度变化的适应调节，海水和淡水养殖鱼类不同组织的PRLR基因的表达水平存在差异，可用来检测花鲈的养殖盐度差异。

发明内容

本发明的目的在于提供一种判断花鲈养殖水体的方法，以确定花鲈是淡水养殖还是海水养殖，为区分养殖花鲈产品提供质量评价依据。

为了解决上述的技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种判断花鲈养殖水体的方法，包括以下步骤：

（1）提取待判断花鲈组织的总RNA，所述组织为鳃或肾脏组织；

（2）根据M-MLV逆转录酶试剂盒的操作说明，以上述总RNA为反应物合成cDNA第一条链；

（3）分别以引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为正向引物和反向引物，以上述cDNA第一条链为模板，在PCR buffer、dNTP、Taq酶以及灭菌的去离子水存在下，进行PCR扩增反应得到扩增产物；

（4）利用凝胶电泳检测上述扩增产物，如果电泳图上有催乳素受体基因表达条带，则待判断花鲈的养殖水体为海水，如果电泳图上没有催乳素受体基因表达条带，则待判断花鲈的养殖水体为淡水；即完成花鲈养殖水体的判断；

其中，SEQ ID NO.1为5’- CAACATCACCGTGGTGGCCACCAACGC-3’； SEQ ID NO.2为5’-TCGCAGCTGCCCCGGCCGGAGT-3’。

优选的技术方案，步骤（1）中，所述组织为鳃。

上述技术方案中，步骤（1）中，提取待判断花鲈组织的总RNA的具体步骤为：将组织放入研钵中，加入液氮，待液氮挥发后把组织研磨成粉末；把组织粉末放入离心管，加入Trizol试剂裂解5～10分钟，然后加入氯仿室温静置15～20分钟，在离心机中以12000转/分钟离心15～20分钟，取上清，加入异丙醇静置10～20分钟；然后以12000转/分钟离心10～15分钟，倒去上清，加75%酒精洗涤沉淀，离心后倒掉上清，剩余物即为待判断花鲈组织的总RNA。

上述技术方案中，步骤（3）中，正向引物、反向引物、cDNA第一条链、PCR buffer、dNTP、Taq酶以及灭菌的去离子水的体积比为1∶1∶1∶2.5∶2∶0.1∶17.4。

上述技术方案中，步骤（3）中，所述PCR扩增反应的条件为：95℃预变性5min，94℃变性30s，退火温度68℃，退火时间30s，72℃延伸30s，30个循环，最后72℃10min。

上述技术方案中，步骤（4）中利用凝胶电泳检测扩增产物时的琼脂糖凝胶浓度为0.1%。

本发明中，步骤（2）所合成的cDNA第一条链置于-20℃保存或立即用作下一步的PCR扩增的模板；步骤（3）的正向引物与反向引物以催乳素受体基因为目的基因设计；PCR扩增反应体系的体积没有特别限定，可以为总共25μl的PCR反应体系，也可以为总共50μl的PCR反应体系。催乳素受体基因（prolactin receptor,PRLR）参与鱼类适应盐度变化的适应调节，海水和淡水养殖鱼类不同组织的PRLR基因的表达水平存在差异，可用来检测花鲈的养殖盐度差异。

由于上述技术方案运用，本发明与现有相比有如下优点：

本发明首次公开了一种判断花鲈养殖水体的方法，通过检测花鲈催乳素受体基因在花鲈鳃或肾脏组织的表达有无，可有效鉴别花鲈是淡水养殖或是海水养殖的产品；该方法操作简便，结果准确，可应用在水产品市场的监管领域。

附图说明

图1为实施例中海水养殖花鲈和淡水养殖花鲈各组织催乳素受体（PRLR）基因与β-actin基因的表达电泳图。

具体实施方式

下面结合实施例与附图对本发明做进一步阐述。