[发明专利]一种SjHSP90重组蛋白及其在血吸虫病诊断及疗效考核中的应用

说明书

技术领域

一种日本血吸虫热休克蛋白SjHSP90重组蛋白及其在血吸虫病诊断及疗效考核中的应用，属于免疫学领域。 

背景技术

血吸虫病是一种严重危害人类健康的传染性疾病，目前全世界有74个国家流行血吸虫病，7.79亿人受到血吸虫病的威胁，2亿多人感染血吸虫病。我国是日本血吸虫病流行最严重的国家，主要流行于我国沿长江及其以南的十二个省、市、自治区，至2012年血吸虫病人数仍然高达24万。诊断是血吸虫病防治领域的中心环节。常用的血吸虫病原学诊断方法，由于其敏感性低、漏检率高，操作繁琐、人群依从率低等缺点，已不能满足当前现场防治工作的需要。

免疫诊断方法由于其快速、简便，并具有较高的敏感性和特异性，在我国血吸虫病防治工作中发挥了重要的作用。目前常用的免疫诊断方法均以检测血吸虫病人体内的抗体为依据，如间接血凝试验（IHA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和胶体染料试纸条法（DDIA）等，这些方法具有较高的敏感性和较好的特异性，在现场得到了广泛的应用，但由于流行区病人体内特异性抗体(主要为IgG)将在体内持续很长时间，即使在治愈后也不会很快消失，且在无再感染的情况下也将持续数年而不消失。因此发展有效疗效考核的免疫诊断方法成为血吸虫病防治工作中亟待解决的重大问题。

为解决当前血吸虫病防治工作中疗效考核这一难点问题——评价化疗效果，较准确的确定化疗对象，朱荫昌等用SDS-PAGE和Western blot对日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）进行了分析，发现血吸虫虫卵组分抗原（107-121kDa）具有较好的诊断价值和考核疗效的作用，但是由于制备该组分抗原采用了从天然抗原SEA中提取的方法，制备方法复杂，得率低，限制了该组分抗原在现场查病中的大规模应用。本课题组在前期工作中采用蛋白组学方法分析该血吸虫虫卵组分抗原中的蛋白分子，筛选到SjHSP90重组蛋白分子，鉴定其具有诊断和疗效考核价值。

HSP90蛋白是广泛存在于细胞内的一类高度保守的分子伴侣，通过维持其受体蛋白的稳定与活性而间接参与调控细胞内多条重要的信号传导通路，其独特的性质使其成为肿瘤诊断的标志物和治疗的分子靶点。到目前为止，还没有出现关于本发明SjHSP90重组蛋白应用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种含日本血吸虫热休克蛋白SjHSP90基因的重组表达载体，该重组载体表达的SjHSP90重组蛋白，可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。

进一步目的在于提供一种以SjHSP90重组蛋白为基础建立的血吸虫病免疫诊断方法。

为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

一种日本血吸虫热休克蛋白SjHSP90重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

所述SjHSP90重组蛋白的制备方法，将扩增的SjHSP90基因，双酶切定向克隆到pET28a(+)载体上，经酶切鉴定和测序确认无误，获得重组质粒pET28a-SjHSP90；将重组质粒pET28a-SjHSP90传化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导目的蛋白表达，12% SDS-PAGE电泳显示融合蛋白分子量82kDa，与预计分子量一致；破菌上清经金属螯合柱亲和层析进一步得到纯化，SjHSP90重组蛋白纯度达到95%。

所述SjHSP90重组蛋白的的应用，用于诊断血吸虫病。

所述SjHSP90重组蛋白的的应用，用于血吸虫病的疗效考核。

本发明的一个方面，优选的，所述表达载体为原核表达载体；更优选的，所述表达载体为原核表达载体pET28a(+)。

在本发明的另一方面，提供了一种包含上述重组表达载体的大肠杆菌宿主细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种日本血吸虫SjHSP90重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：

构建含SjHSP90基因的重组表达载体；

将所述重组表达载体转化入大肠杆菌宿主细胞；

培养包含重组表达载体的大肠杆菌宿主细胞，并在合适条件下，诱导该重组表达载体表达SjHSP90重组蛋白。

纯化诱导表达的SjHSP90重组蛋白。

本发明的另一方面，还提供了一种上述重组表达载体在制备诊断血吸虫病的产品中的应用。

本发明重组载体表达的SjHSP90重组可以作为诊断抗原，对血吸虫病人或病畜进行诊断和疗效考核。