[发明专利]胆道闭锁及淤胆型婴儿肝炎综合征的microRNA血清标志物检测及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一类可用于区分胆道闭锁及淤胆型婴儿肝炎综合征患儿的microRNA血清标志物的检测以及用途。本发明还涉及检测所述microRNA标志物的芯片和试剂盒。

背景技术

胆道闭锁是以肝内外胆管闭锁和梗阻性黄疸为特点的小儿外科常见畸形，其发病率为1/5000-1/8000。是一种发生于儿童，以进行性硬化性胆管炎症，各级胆管梗阻和破坏，肝纤维化和肝硬化形成为基本病理特点的疾病。许多患儿往往在确诊胆道闭锁时即已存在严重的肝脏纤维化，并且很快发展成为肝硬化，最终导致肝功能衰竭。因此，胆道闭锁的尽早诊断就愈发显得迫切。

基因作为生命的遗传介质，在生物体的生、老、病、死中处于基础内因的地位。绝大部分基因通过转录生成核糖核酸，再翻译生成蛋白质而发挥生物学功能。

microRNA（微小RNA）是一类在较高等的真核生物体内广泛存在的，长度约21到23个碱基的单链RNA分子。它可以通过碱基配对原则特异性地与一些mRNA上的靶位点相结合，引起靶mRNA降解或翻译抑制，进而在转录后水平对靶基因进行调控。从而抑制转录后基因表达，在调控基因表达、细胞周期、生物体发育时序等方面起重要作用。在动物中，一个微RNA通常可以调控数十个基因。

microRNA来源于长度约为1000bp的长链RNA初始转录产物（Pri-microRNA)，Pri-microRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60-80nt的具有茎环结构的microRNA前体。microRNA前体转运至胞质后，被Dicer酶进一步切割成长约22nt的双链microRNA。双链microRNA解开后，成熟的microRNA进入RNA诱导基因沉默复合物，与互补mRNA完全或不完全配对，降解靶mRNA或阻遏其表达。

尽管microRNA在细胞总RNA中所占的比重很小，但由于它可以高效地对所有具有靶位点的mRNA产生调控作用，microRNA在生物体的发育乃至疾病的发生、发展过程所起的作用仍不可小视。然而，迄今为止，本领域对于与胆道闭锁相关的microRNA了解甚少，因此本领域迫切需要进一步地分离各种microRNA，尤其是与疾病的发生、预后或检测有关的microRNA。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的、可用于区分胆道闭锁及淤胆型婴儿肝炎综合征患儿的microRNA标志物及其在制备相关疾病检测制剂中的应用。

本发明的另一目的就是提供所述microRNA标志物的检测方法，该方法比现有检测技术省时、灵敏度与准确度更高、成本更低、和/或更高效。

本发明提供了hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429在制备胆道闭锁诊断制剂中的应用。

例如，hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429作为区分胆道闭锁或者淤胆型婴儿肝炎综合征患儿的microRNA血清标志物。又如，将hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429作为治疗或者辅助治疗胆道闭锁或者淤胆型婴儿肝炎综合征的药剂的筛药靶标。

试验表明，胆道闭锁血清中，hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p表达量高于淤胆型婴儿肝炎综合征，而hsa-miR-4429表达量下降。表达量差异具有统计学意义上的显著性差异。

本发明提供了检测hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429的表达的方法：

（1）采用microRNA芯片技术检测胆道闭锁血清中hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429的表达；

或者

（2）采用荧光定量PCR技术检测hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-4429的表达情况。

所述的检测hsa-miR-150、hsa-miR-4689、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-4429的表达所用的探针，包括：

CUGGUACAGGCCUGGGGGACAG（SEQ ID NO1）；

UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU（SEQ ID NO2）；